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啟動(dòng)子和信號(hào)肽之間存在不匹配的問題嗎？如PgpdA和ssGlaA
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我在真菌的異源表達(dá)上遇到了問題。 我需要把一個(gè)目的基因（酶）轉(zhuǎn)到黑曲霉中，希望實(shí)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)異源表達(dá)把酶運(yùn)輸?shù)桨�，用的是共轉(zhuǎn)化的方法，自己構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒。 我構(gòu)建的質(zhì)粒是這樣的，PgpdA+ssGlaA+MCS+目的基因（去信號(hào)肽）+TtrpC，把表達(dá)質(zhì)粒和共轉(zhuǎn)化質(zhì)粒（尿苷缺陷性）通過共轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)到黑曲霉里。 現(xiàn)在篩選到的轉(zhuǎn)化子中能夠提出RNA并且反轉(zhuǎn)錄出我的目的基因，但是胞外沒有酶活，提胞外蛋白也找不到與空白對(duì)照之間的區(qū)別。 現(xiàn)在想知道有沒有可能是啟動(dòng)子和信號(hào)肽的選擇有問題，PgpdA是組成型強(qiáng)啟動(dòng)子，ssGlaA也是用的很廣的信號(hào)肽，但是一般人都是用啟動(dòng)子PglaA和ssGlaA一起，想知道他們之間會(huì)不會(huì)有特定的比配，PgpdA和ssGlaA會(huì)不會(huì)不能一起用。 跪謝 |
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