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mahanxiaoa新蟲 (初入文壇)
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[交流]
有關(guān)PCR退火溫度設(shè)計的問題
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請教大家一個問題我設(shè)計的一對引物如下：F-Primer CGCTACAGCGCCGTCGCCA R-Primer GATCTCGACGCCGATGGCCTT Percent GC: 73 Percent GC: 61 Tm: 67 Tm: 64 如果嚴格按照引物設(shè)計原則這對引物是不符合要求的，但由于序列的原因，只能這樣設(shè)計了。麻煩大家能不能推薦幾個網(wǎng)上自動設(shè)計引物的網(wǎng)址？如果Tm如上面所示，那我進行PCR時退火溫度應(yīng)該設(shè)為多少？另外我要驗證目的基因與載體連接成功與否除了菌落PCR和雙酶切驗證外還有沒有別的方法？請各位指點迷津，謝謝！ |
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4樓2014-11-24 14:22:38
怪叔叔推倒你
木蟲 (正式寫手)
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- 性別: GG
- 專業(yè): 理論和計算化學
|
http://primerdepot.nci.nih.gov/ ，我們用這個設(shè)計的引物序列； 一般選擇退火溫度 TM-5℃，Primer premier 5.0可以軟件計算。 |
2樓2014-10-24 16:51:58
mahanxiaoa
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3樓2014-10-28 16:31:37
mahanxiaoa
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5樓2015-01-16 12:59:28
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