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求助 毛狀根一直誘導不出 求大神指導 已有6人參與
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如題 毛狀根誘導已經做了差不多兩個月了,還是沒什么結果,想請教一下有做過毛狀根誘導的大神。我們的步驟是這樣的,外植體是冬凌草,是香茶菜科的植物,菌種是在華南菌種保藏中心買的atcc11325,用ynb培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的,誘導方法是先把葉片從外植體切下,接到培養(yǎng)基上黑暗預培養(yǎng)2d以上(培養(yǎng)基有用ms還有誘導愈傷組織的培養(yǎng)基),菌種買來后經過三次繼代活化后劃平板挑單菌落,搖出來后甘油保種,要侵染之前2d先活化一次,再用錐形瓶搖,接種量為百分之1,侵染時用ms培養(yǎng)液把其稀釋到od600=0.4 加入AS母液使其終濃度為100umol/L ,侵染30min,侵染后放回原培養(yǎng)基共培養(yǎng)1d,之后就用400cef的除菌培養(yǎng)基除菌,但是等了兩個星期以上都沒有出現(xiàn)毛狀根,不過邊緣有愈傷組織生長。請問我們的實驗步驟有沒有問題?我們初步分析有可能是菌種問題,請問該菌株的侵染是否有種屬的選擇性?虛心請教,先謝謝各位了 |
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