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xy656691金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
BIFC實(shí)驗(yàn)，會(huì)因?yàn)锳、B和YNE、YCE的不同組合導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同嗎？ 已有3人參與
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Ａ蛋白融合在YNE，B蛋白融合在YCE。觀(guān)察到Y(jié)FP熒光；B蛋白在融合YNE，A蛋白融合在YCE。觀(guān)察不到Y(jié)FP熒光。這樣問(wèn)題就來(lái)了�。。� 1，這能說(shuō)明AB蛋白能夠相互作用嗎？ 2，出現(xiàn)這種情況是否因?yàn)椴煌M合形成的融合蛋白導(dǎo)致A、B蛋白暴露出的結(jié)合位點(diǎn)不同？ |
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sun_in_night
木蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
xy656691: 金幣+3, ★★★很有幫助, 謝謝，之前不知道fret這個(gè)實(shí)驗(yàn)。 2014-11-06 09:20:15
xy656691: 金幣+3, ★★★很有幫助, 謝謝，之前不知道fret這個(gè)實(shí)驗(yàn)。 2014-11-06 09:20:15
| 個(gè)人其實(shí)不推薦用Y2H,因?yàn)槿绻皇墙湍傅鞍�，而是其他物種蛋白，那么蛋白在酵母中的表達(dá)形態(tài)，量度，位置等等有可能完全和原來(lái)物種中的不一樣。所以現(xiàn)在一般Y2H只是用來(lái)做篩選互作蛋白，但是進(jìn)一步鑒定一般用其他方法，像你用的BiFC，還有Fret，pull down等等。但是每種方法都各有利弊，所以一般會(huì)用多種方法相結(jié)合來(lái)驗(yàn)證蛋白互作。 |
7樓2014-11-06 02:38:45
AQ-Bio-Z
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2樓2014-11-01 17:37:44
starseacow
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3樓2014-11-02 19:26:35
xy656691
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4樓2014-11-03 20:25:12
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