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maweisimple鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
HRP標(biāo)記抗體 已有4人參與
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大家好,最近做HRP標(biāo)記抗體,參照的是Bioconjugate Techniques,3rd Edition和Thermo的sulfo-SMCC的說(shuō)明書(shū),可是經(jīng)過(guò)ELISA檢測(cè),完全沒(méi)標(biāo)上。請(qǐng)問(wèn)大家有做過(guò)這個(gè)標(biāo)記的嗎?是什么樣的流程呢?哪個(gè)步驟是最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)? 拜托拜托~ |

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

銅蟲(chóng) (小有名氣)
| 1.HRP分子上缺少能反應(yīng)的氨基。2.SMCC是一種異型雙功能基團(tuán),一端和氨基反應(yīng),另一端和巰基反應(yīng)。3.天然IgG上也缺少能反應(yīng)的自由巰基,要利用DTT或其他一些試劑修飾出能反應(yīng)的自由巰基。4.一般HRP標(biāo)記IgG,先用高碘酸鈉氧化HRP,產(chǎn)生醛基,醛基能和IgG上富含的氨基生成席弗堿反應(yīng),從而達(dá)到耦聯(lián)目的。 |

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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