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鬼羽帝魂木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助：關于伏馬菌素提取凈化和測定過程中的柱子問題。
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急求：有誰做過谷物伏馬菌素FB1、FB2測定的，（是由串珠鐮刀菌 (Fusarium moniliforme Sheld)產(chǎn)生的水溶性代謝產(chǎn)物，是一類由不同的多氫醇和丙三羧酸組成的結構類似的雙酯化合物。）我的是用產(chǎn)毒菌株接種玉米樣品培養(yǎng)一段時間后，粗提取樣品過0.22um濾膜去測定，未稀釋和稀釋20倍均用LC/MS-MS沒有測定出來，標準品加甲醇測得出來，最低可檢測到5ppb，但加標時（把標品加到ck樣品中，濃度是10ppb）也沒有測定出來，測定人員說可能是我的樣品雜質(zhì)太多了，（我自己也不確定，聯(lián)系公司技術人員說一般來講菌株接種雜質(zhì)還是很少的）我現(xiàn)在是想用凈化柱除雜，有SAX、SPE柱、免疫親和柱，不知用哪個比較好； 查文獻說 1）1SAX柱可獲得比 SPE C．8柱更好的純化效果，應用也最為普遍。過柱時樣品 提取液的 pH是影響純化效果的最關鍵因素，必須調(diào)節(jié)合適，一般要求 pH大于 5．8，并且要嚴格控制流速不能大于 lml／min，但對大米樣品而言，提取液的 pH要求調(diào)節(jié)到 6．2 雖然 SAX柱在伏馬菌素純化中使用較普遍，但它不能用來純化水解的伏馬菌素，因為水解部分缺少 SAX柱純化過程中所需的陰離子 。 2 ）SPE C18柱可強烈吸附伏馬菌素,由于洗脫較 為困難 ，回收率不 夠穩(wěn) 定，但該純化柱 可以分離水解 的伏 馬菌素 。它 已被應用 到玉米 、牛奶 中水解的伏馬菌素純化.。 3）SPE和 SAX聯(lián)合柱可同時純化伏 馬菌素和水解的伏馬菌素 。特別是堿處理過的 玉米樣品提取 液中，同時含有伏馬菌素和水解 的伏 馬菌素 ，純化時首先將樣 品提取液通過 SAX柱分離伏馬菌素，然后再將洗脫液通 過 C18,以分離水解的伏馬菌素。 4）免疫親和柱中含有與伏馬菌素結合的抗體，可選擇性地吸附伏馬菌素，因此，該方法 分離純化效果好．檢測靈敏度高，快速，但免疫親和柱的純化容量比較小。 我的樣品經(jīng)過別的方法提取后做ELISA都是在10ppm以上，即10ug/g（提取樣品是1g），我查了一下拜發(fā)公司（行業(yè)比較好的）的免疫親和柱最大為10ug,因為柱子也比較貴，所以想大家?guī)臀曳治鱿拢降自趺唇鉀Q，還有以上柱子哪種比較好，在哪買？我問了幾家比較好的公司都沒有，waters也沒有SAX（建議我用那個弱酸性的陰離子交換柱）。但是我看文獻測這種毒素的普遍用的是SAX，但是SAX(SAX, Strong anion exchange)強堿性的，毒素是弱酸性的，我很奇怪為何？。如果有好的建議請回復，謝謝大家。有傳文件等可發(fā)到我的郵箱mengyinweixue@sina.com |
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