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sxzxs新蟲 (初入文壇)
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[求助]
大家 幫我看看我的WB圖 以后做時還需要注意什么
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我做的一個大鼠指標(biāo)，用的是ABCAM的一個 兔的多克隆抗體，種屬反應(yīng)是人，但predict to work with：rat，沒有更好的，所以就只能用這個試試了。按照常規(guī)WB做法，封閉液選擇的奶粉，一抗稀釋1500倍，二抗國產(chǎn)羊抗兔，稀釋5000倍。目的蛋白是33kd，圖上由左至右，1234樣品都是甲狀腺，1和2是一個甲狀腺提取的蛋白質(zhì)，3和4是半個甲狀腺。5和6是肝臟。7和8是腎臟。蛋白原液稀釋20倍檢測濃度，上樣前經(jīng)過計算保證上樣量一致，都是正常鼠的組織，只是為了驗證下一抗。沒做內(nèi)參。 marker由上到下，分別為70 55 40 35 25 圖上上面較亮的一條，分子量約為55和40之間的應(yīng)該是條雜帶吧，不過卻非常清晰，下面那條稍暗的條帶，與35的marker比較接近，應(yīng)該是目的條帶。 大家?guī)椭纯矗?br /> 1.這個圖總體咋樣，實驗中還有哪些需要注意的地方，可以使實驗圖更完美？ 2.最亮的那個條帶是怎么回事呢，會影響我的實驗結(jié)果么 3.3和4 條帶要比1和2弱，我覺得可能是蛋白濃度測的不準(zhǔn)，造成的差異，因為后兩個組織是用了半個甲狀腺，配置樣品時蛋白原液1和2大約是50ul，3和4大約是65ul，雖然是根據(jù)濃度算的，但并沒有增加一倍蛋白量。 |
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2014-11-06 17:38:09, 163.74 K
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2樓2017-05-17 13:41:10
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