版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號(hào)能夠正常使用，請(qǐng)盡快對(duì)帳號(hào)進(jìn)行手機(jī)號(hào)驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜

北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

返回列表

上一頁(yè)

下一頁(yè)

半島鐵盒l(wèi)sf

新蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 94
帖子: 90
在線: 20小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1396777
注冊(cè): 2011-09-09
專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題

引用回帖:

10樓: Originally posted by wg0541001 at 2014-11-12 20:27:03
可能有點(diǎn)大了，我以前擴(kuò)增真菌里的cDNA片段，actin可以擴(kuò)出來(lái)，但是2kb的片段就擴(kuò)不出來(lái)，后來(lái)用了overlap的方法，分兩個(gè)片段，每個(gè)1.1kb左右，之后overlap連接上的。...

overlap是要設(shè)計(jì)兩對(duì)引物了，中間用目的序列中的酶切位點(diǎn)連接？？？今天一個(gè)師姐提醒我說(shuō)提RNA質(zhì)量很重要，P不出來(lái)可能是RNA斷了，反轉(zhuǎn)錄的cDNA不是全長(zhǎng)，說(shuō)讓先把RNA的質(zhì)量提上來(lái)，她說(shuō)以前P過(guò)8k的。你怎么看

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2014-11-13 11:55:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

匿名

用戶注銷(xiāo) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
金幣: 2827.5
散金: 390
紅花: 6
帖子: 859
在線: 222.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 0
注冊(cè): 2008-03-28
性別: GG
專業(yè): 天然有機(jī)化學(xué)

★
半島鐵盒l(wèi)sf(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-15 14:42:45

本帖僅樓主可見(jiàn)

贊一下

12樓2014-11-13 16:47:14

已閱申請(qǐng)MolEPI 回復(fù)此樓編輯查看我的主頁(yè)

半島鐵盒l(wèi)sf

新蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 94
帖子: 90
在線: 20小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1396777
注冊(cè): 2011-09-09
專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題

引用回帖:

12樓: Originally posted by wg0541001 at 2014-11-13 16:47:14
對(duì)啊，RNA提得好的話容易得到全長(zhǎng)的RNA，提不好就是打斷的RNA，長(zhǎng)片段就很難擴(kuò)出來(lái)。
overlap就是設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，最終得到兩個(gè)片段，兩個(gè)片段的尾部之間有一段相同的序列。這樣通過(guò)fusion-PCR的方法可以把基因給連 ...

你說(shuō)的是不是重組PCR？斷裂的點(diǎn)是不知道的，設(shè)計(jì)引物截取目的片段的一半一半？這是不是也挺隨意的，倒霉的話遇到不覆蓋斷裂的地方就還是P不出來(lái)？

贊一下

回復(fù)此樓

13樓2014-11-14 09:26:00

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

匿名

用戶注銷(xiāo) (正式寫(xiě)手)

應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
金幣: 2827.5
散金: 390
紅花: 6
帖子: 859
在線: 222.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 0
注冊(cè): 2008-03-28
性別: GG
專業(yè): 天然有機(jī)化學(xué)

★
半島鐵盒l(wèi)sf(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-15 14:43:01

本帖僅樓主可見(jiàn)

贊一下

14樓2014-11-15 12:44:11

已閱申請(qǐng)MolEPI 回復(fù)此樓編輯查看我的主頁(yè)

半島鐵盒l(wèi)sf

新蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 94
帖子: 90
在線: 20小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1396777
注冊(cè): 2011-09-09
專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題

又學(xué)習(xí)到了，非常感謝，這個(gè)需要六個(gè)引物呀！感覺(jué)好多，不知道你做起來(lái)麻煩嗎？

贊一下

回復(fù)此樓

15樓2014-11-16 22:54:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

半島鐵盒l(wèi)sf

新蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 94
帖子: 90
在線: 20小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1396777
注冊(cè): 2011-09-09
專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題

引用回帖:

8樓: Originally posted by running113 at 2014-11-12 15:10:36
目的片段長(zhǎng)度，引物，PCR程序，基因表達(dá)峰度，都有可能影響！
樓主可以試試。
最近也在擴(kuò)目的帶，很麻煩。

請(qǐng)問(wèn)你的弄出來(lái)了嗎?我還在糾結(jié)

贊一下

回復(fù)此樓

16樓2014-11-16 23:18:02

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

半島鐵盒l(wèi)sf

新蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 94
帖子: 90
在線: 20小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1396777
注冊(cè): 2011-09-09
專業(yè): 藥理學(xué)其他科學(xué)問(wèn)題

引用回帖:

14樓: Originally posted by wg0541001 at 2014-11-15 12:44:11
有點(diǎn) 不同的，我給你發(fā)篇文獻(xiàn)連接就是說(shuō)FusionPCR的：Fusion PCR and gene targeting in Aspergillus nidulans， Nature Protocol的文章。

還有一篇是具體的操作步驟，我分享給你看看，希望對(duì)你有幫助。我P長(zhǎng)片 ...

我現(xiàn)在提取得到的是總的RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，在P目的條帶，也就是說(shuō)我沒(méi)有任何可以拿來(lái)融合的條帶

贊一下

回復(fù)此樓

17樓2014-11-16 23:20:04

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wxk19960113

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 170.7
帖子: 58
在線: 60.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 3515555
注冊(cè): 2014-11-03
專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

【答案】應(yīng)助回帖

內(nèi)參能擴(kuò)增出來(lái)，說(shuō)明你的模板應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，最有可能是你的引物設(shè)計(jì)有問(wèn)題，重新設(shè)計(jì)引物試試吧。

[ 發(fā)自小木蟲(chóng)客戶端 ]

贊一下

回復(fù)此樓

18樓2014-11-17 01:32:19

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

百褶裙de夏天

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 8.6
帖子: 19
在線: 2.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2585628
注冊(cè): 2013-08-07

【答案】應(yīng)助回帖

你逆轉(zhuǎn)錄的引物是什么啊，oligodT還是隨機(jī)引物，如果你用的是隨機(jī)引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄的，你擴(kuò)不出來(lái)很正常。

贊一下

回復(fù)此樓

19樓2014-11-17 09:30:40

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

289363400

鐵桿木蟲(chóng) (知名作家)

凌亂前進(jìn)方向

應(yīng)助: 6 (幼兒園)
金幣: 6473.8
散金: 224
紅花: 1
帖子: 6711
在線: 523小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2099305
注冊(cè): 2012-11-01
性別: GG
專業(yè): 電路與系統(tǒng)

【答案】應(yīng)助回帖

不知道這個(gè)基因的表達(dá)水平如何呢，如果很低的話，不比管家基因的高水平表達(dá)，想P出來(lái)就有難度。如果有的話，你可以參考一下關(guān)于這個(gè)基因的其它文獻(xiàn)嘛，或者不同種屬的也可以。

贊一下

回復(fù)此樓

20樓2014-11-17 09:38:02

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主半島鐵盒l(wèi)sf 的主題更新

返回列表

上一頁(yè)

下一頁(yè)

普通表情龍兔虎貓

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 330分求調(diào)劑 +3	qzenlc 2026-03-29	3/150	2026-03-29 06:18 by 544594351
[考研] 調(diào)劑310 +7	溫柔的晚安 2026-03-25	8/400	2026-03-29 01:09 by 我是小康
[碩博家園] 求調(diào)劑 330分 085600材料與化工 +3	gqhhh 2026-03-22	3/150	2026-03-29 00:52 by 544594351
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，321分求調(diào)劑 +4	大饞小子 2026-03-28	4/200	2026-03-29 00:32 by 544594351
[考研] 311（085601）求調(diào)劑 +4	liziyeyeye 2026-03-28	4/200	2026-03-28 18:50 by 535743368
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動(dòng)285求調(diào)劑 +3	AZMK 2026-03-27	5/250	2026-03-28 16:19 by xxxsssccc
[考研] 【求調(diào)劑】085601材料工程專碩 \| 總分272 \| +6	腳滑的守法公民 2026-03-27	6/300	2026-03-28 11:02 by gjlllb
[考研] 0856，材料與化工321分求調(diào)劑 +12	大饞小子 2026-03-27	13/650	2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 張芳銘-中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-環(huán)境工程專碩-298 +4	手機(jī)用戶 2026-03-26	4/200	2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 求調(diào)劑 +8	張zz111 2026-03-27	9/450	2026-03-28 03:41 by fmesaito
[考研] 285求調(diào)劑 +4	AZMK 2026-03-27	7/350	2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 272求調(diào)劑 +7	腳滑的守法公民 2026-03-27	7/350	2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9	大饞小子 2026-03-27	9/450	2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 0703化學(xué)一志愿南京師范大學(xué)303求調(diào)劑 +3	zzffylgg 2026-03-24	3/150	2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 349求調(diào)劑 +4	李木子啊哈哈 2026-03-25	4/200	2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 材料調(diào)劑 5+4	想要一壺桃花水 2026-03-25	10/500	2026-03-26 19:56 by 不吃魚(yú)的貓
[有機(jī)交流] 有機(jī)合成求助 20+3	FENGSHUJEI 2026-03-23	5/250	2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7	jhybd 2026-03-23	12/600	2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300) +5	番茄頭--- 2026-03-22	6/300	2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 328求調(diào)劑 +4	LHHL66 2026-03-23	4/200	2026-03-23 14:55 by lbsjt