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半島鐵盒l(wèi)sf新蟲 (小有名氣)
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[求助]
反轉(zhuǎn)錄后PCR擴(kuò)不出目的條帶 已有7人參與
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| 最近剛開始自己的實(shí)驗(yàn)，只有一個(gè)細(xì)胞株，想要從這個(gè)細(xì)胞株里提RNA，反轉(zhuǎn)錄后PCR擴(kuò)出需要的目的基因序列。反轉(zhuǎn)錄后PCR用了GAPDH的引物做對照，GAPDH能夠擴(kuò)出來，但是需要的目的基因條帶一直擴(kuò)不出來，條帶都沒有。模板、引物、酶量、溫度梯度都試過，一直失敗中，希望大家多給指點(diǎn)指點(diǎn)，求分享經(jīng)驗(yàn)！另外，如果我需要其他的目的基因序列，能也從這個(gè)細(xì)胞株里相同方法得到嗎？謝謝 |
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shoufangche
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2樓2014-11-11 12:27:23
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| 擴(kuò)不出來原因有很多，需要逐步排查原因。我覺得可以考慮先找其他質(zhì)量可以的cDNA看看你的引物質(zhì)量如何，如果引物設(shè)計(jì)有問題怎么擴(kuò)都不會有帶的。其次，先弄清楚該基因在你那個(gè)細(xì)胞株里面表不表達(dá)，表達(dá)時(shí)間等等。再次，RNA提取質(zhì)量要有保證，這樣反轉(zhuǎn)錄效率才高，模板質(zhì)量有保證。 |
3樓2014-11-11 14:49:47
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4樓2014-11-11 20:18:33
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5樓2014-11-11 20:24:04
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9樓2014-11-12 15:33:05
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10樓2014-11-12 20:27:03
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