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gloryping鐵桿木蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR擴(kuò)不出目的基因
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| 從細(xì)胞中抽提RNA，然后反轉(zhuǎn)錄為cDNA，在做定量PCR前先做普通PCR，可是擴(kuò)了好幾次都沒擴(kuò)出來，跟文獻(xiàn)用的是同樣的引物，PCR反應(yīng)條件也是參考文獻(xiàn)中的，使用了genomic DNA 作為內(nèi)參，但最終是只有引物二聚體，擴(kuò)不出目的條帶。不知RNA及后續(xù)cDNA質(zhì)量會(huì)不會(huì)影響PCR，本人是新手，求指教！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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gloryping(金幣+2): 2011-09-18 17:26:12
lstt09nk(金幣+2): 熱心蟲友 2011-10-11 14:33:02
gloryping(金幣+2): 2011-09-18 17:26:12
lstt09nk(金幣+2): 熱心蟲友 2011-10-11 14:33:02
| 做不出來有很多原因的，但鑒于你是新手，我個(gè)人覺得是不是有些東西加多了，比如酶一般25u的體系加0.5就很多了，但如果你把槍頭完全插進(jìn)去，壁上沾的就不僅僅0.5了，慢慢來，多試幾遍，一定要小心謹(jǐn)慎。生物114 http://www.shengwu114.com/ |
2樓2011-09-18 17:24:40
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4樓2011-09-19 09:51:51
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11樓2011-10-11 11:06:05
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7樓2011-09-19 12:39:07
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