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three姚銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
DGGE銀染，泳道顏色為什么這么深？ 已有3人參與
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如下圖，我這批樣品的PCR條帶不是特別亮，所以DGGE效果也不好，只能隱約看到一些很淺的條帶，但是不知道為什么泳道的顏色特別深，尤其是頂部和底部顏色很深，還有之前一次做的條帶很清晰，但是泳道顏色也很深，想請(qǐng)教一下是什么原因？我用的引物是f338-GC/r518，膠的濃度是8%，變性梯度40~65%，染色方法是銀染法。具體染色過(guò)程是： 1.取下膠板后，放在塑料盤里，用去離子水把膠從玻璃板上洗下來(lái)，再多清洗一次（每次清洗1~2min） 2. 加250ml固定液（10%冰醋酸溶液）固定15min 3. 倒掉固定液，去離子水洗兩次（每次1~2min） 4. 加250ml印染液（0.2%硝酸銀溶液，用之前加200μL甲醛），輕輕搖動(dòng)，染色15min 5. 倒掉印染液，去離子水洗兩次（每次1~2min） 6. 加250ml顯色液（1.5% NaOH溶液，用之前加1.25ml甲醛），輕輕搖動(dòng)，直到條帶清晰為止（15~20min） （所有溶液都沒(méi)有重復(fù)利用，都是從事先配好的溶液里取的） 因?yàn)閷?shí)驗(yàn)比較急，希望大家能提供一些合理的建議和可行的方法，多謝了！ 這一次的結(jié)果 之前一次的結(jié)果，條帶很清晰，但是泳道顏色還是很深 |
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2樓2014-11-14 10:57:40
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