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BCK920314新蟲(chóng) (初入文壇)
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pET 28α在DH5α中搖菌18個(gè)小時(shí)，菌濃度低，質(zhì)粒得量低是怎么個(gè)情況�。� 已有12人參與
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菌種是去年3月份的，昨天分裝成小份約100μl的，并且取了其中一份做平板劃線，劃了5個(gè)，平板含千分之一的卡那霉素，加入抗生素時(shí)培養(yǎng)基溫度大概在55-60之間吧。 37度，30轉(zhuǎn)倒置培養(yǎng)過(guò)夜（搖床設(shè)置鍵失靈了。。。），不知道什么時(shí)候溫度降下來(lái)了，早上去看的時(shí)候有很小的單菌落，非常非常小，能看到，但沒(méi)辦法挑，之后又在37度培養(yǎng)了4個(gè)小時(shí)，才有明顯的10μl槍頭尖大小的單菌落，才開(kāi)始挑單克隆菌。 發(fā)現(xiàn)總體的菌落不多，之字劃線5邊，就第二邊開(kāi)始的地方有單菌落，之后都沒(méi)有。 5個(gè)板挑了10個(gè)單菌落進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件如下 50ml離心管中加10ml LB液體培養(yǎng)基加10μl卡那霉素，混勻后開(kāi)始用10μl滅菌過(guò)的槍頭挑單菌落，槍頭沾到菌落后就丟入到50ml離心管中。 封口膜封好，37度200rpm搖菌18小時(shí)，用96酶標(biāo)板測(cè)得OD600為1.609 2ml菌提取的質(zhì)粒只有1.8μg左右 求助怎么讓菌濃度升高？ 能用氯霉素促使質(zhì)�？截愒黾用�？具體怎么操作？ 另附今天質(zhì)粒電泳圖 marker是250-15000的，倒數(shù)第三條是2500，質(zhì)粒條帶位置基本正確。上樣8μl。。。質(zhì)粒量實(shí)在是低啊。。。。。。 20141119-1質(zhì)粒_看圖王.jpg 感謝大家對(duì)我帖子的回復(fù)和建議 目前實(shí)驗(yàn)條件是這樣的，我從別的地方要來(lái)的甘油菌，要活化菌種，小搖18個(gè)小時(shí)菌OD才1.6左右，要求OD達(dá)到2.0以上，同時(shí)，要求2ml 菌質(zhì)粒得量大于10μg，但現(xiàn)在質(zhì)粒得量很低，我并沒(méi)有做轉(zhuǎn)化和重組，只是想單純的把菌體數(shù)量提上去并提高質(zhì)粒得量。謝謝大家！ [ Last edited by BCK920314 on 2014-11-21 at 19:35 ] |
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16樓2014-11-21 09:24:24
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