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3‘RACE電泳圖跑成這樣是怎么回事，求高手們指點(diǎn)一下，迷茫 已有1人參與
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我用的是巢式PCR法做的RACE，兩次結(jié)果，產(chǎn)物都積在膠孔處，求教做過3’RACE的朋友們這是怎么回事呢，很迷茫，做不出來。 前4個(gè)是第三次PCR結(jié)果，后兩個(gè)是第二輪PCR結(jié)果。 4)PCR反應(yīng)程序如下 第一次PCR： cDNA 2 μL 10×PCR buffer 2 .5μL Ex Taq HS 0.2 μL dNTP （10 mmol·L-1） 0.3 μL GSP-F1 0.5 μL M13 Primer M4 0.5 μL 超純H2O 18.1 μL 總體積 25 μL 反應(yīng)條件為： 95℃ 5min；95℃ 30s，65℃ 30s，72℃ 1min，3 個(gè)循環(huán)；95℃ 30s，62℃ 30s，72℃ 1min，3 個(gè)循環(huán)；95℃ 30s，59℃ 30s，72℃ 1min，3 個(gè)循環(huán)；95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 1min，3 個(gè)循環(huán)；95℃ 30s，53℃ 30s，72℃ 1min，25 個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min，最后4℃保存。 第二輪和第三輪PCR反應(yīng)分別以上一輪PCR反應(yīng)的產(chǎn)物為底物，未稀釋，程序、體系一樣。 IMG_20141120_112123.jpg |
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已經(jīng)有16人回復(fù)
2樓2014-11-21 13:45:00
3樓2014-11-21 14:22:31
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