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ggyy0911鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
打算在N端加His標(biāo)簽，求個(gè)人幫著看看引物設(shè)計(jì)~急啊 已有4人參與
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因?yàn)?‘端用的NotI，保護(hù)堿基和酶切位點(diǎn)都太長，再加上His標(biāo)簽引物長度都58了，所以打算把His標(biāo)簽挪到5’端上去。 5‘端用EcoRI酶切位點(diǎn)，我的引物序列是AAG ACA TGC CCA AAG GTG AAG，21個(gè) EcoRI用CCG作保護(hù)堿基，GAATTC酶切位點(diǎn)，還得再加個(gè)起始密碼子ATG，然后掛His標(biāo)簽CATCATCACCATCACCAT 所以最后上游引物應(yīng)該是5’-3’ CCGGAATTCATG CATCATCACCATCACCAT AAGACATGCCCAAAGGTGAAG=51個(gè)，所有的密碼子都是正向?qū)懀挥梅聪蚧パa(bǔ)的寫。 51個(gè)��！ 如果我把真正的引物序列減短一些呢，減到18個(gè)左右行不行�；蛘咔蟠蠹医o點(diǎn)建議吧。 還有N端如果加標(biāo)簽的話，據(jù)說會(huì)有不一定能表達(dá)完的蛋白，這樣上柱子的時(shí)候，這些雜蛋白也會(huì)掛上去。但在C端就可以保證蛋白是表達(dá)完整的。 |
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5樓2014-11-22 08:35:29
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