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eskimo_0_0鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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問(wèn)下大家這個(gè)跑膠圖最下面的條帶是二聚體嗎？怎么除不掉 已有1人參與
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這兩幅圖分別是昨天和今天做的細(xì)菌菌落的目的基因pcr，共有5個(gè)基因，片段長(zhǎng)均在100-200bp。引物在設(shè)計(jì)的時(shí)候基本都是選擇的沒(méi)有二聚體的。 第一幅圖是昨天做的結(jié)果，1μl 濃度為10μM的引物，分別用了60-58-52依次降低的退火溫度，退火時(shí)間55s。上樣量5μl。發(fā)現(xiàn)下面有亮的寬帶，今天就重復(fù)做了一次。 今天引物用了10μM的引物0.2、0.5、1μl三個(gè)濃度，60-55-50依次降低的退火溫度，退火時(shí)間30s。上樣量2.5μl，還是有最下面的亮的寬帶。 另外今天多挑了一些菌，增大了模板量，昨天的結(jié)果感覺(jué)已經(jīng)有拖尾了應(yīng)該就是模板量太大的原因吧。菌是直接挑的沒(méi)有煮沸。 想問(wèn)下大家最下面寬的亮的帶是二聚體么，這個(gè)可以避免么，還是所有pcr產(chǎn)物的跑膠結(jié)果都會(huì)有這個(gè)帶。 因?yàn)檫@個(gè)是想給q-pcr設(shè)計(jì)的引物，所以不知道這個(gè)東西有沒(méi)有影響。 2014-11-26.jpg 2014-11-27.png |
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2樓2014-11-28 09:17:14
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3樓2014-11-28 11:06:16
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