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sliencemy新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
微生物實(shí)驗(yàn)
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各位大神求幫忙 我是把豬鏈球菌的一個(gè)蛋白克隆到大腸桿菌里面進(jìn)行表達(dá)的，所用的質(zhì)粒為pet28a，用的表達(dá)載體為BL21，由于蛋白帶有信號(hào)肽，所以我通過(guò)軟件分析把信號(hào)肽去除了。 在蛋白進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)，所用的IPTG濃度為0.5mM，誘導(dǎo)時(shí)間為5個(gè)小時(shí)，誘導(dǎo)的溫度是在30和37攝氏度。蛋白的大小為42kDa左右。 兩張圖分別為His tag標(biāo)簽分別加在載體的C端和N端。由于加在N端，那么我的蛋白加上前面的蛋白序列，那么大小接近46kDa. 我的上樣順序都為C端：1（37攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度 IPTG 0) 2（37攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度 IPTG 0) 3（37攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度 IPTG 0) 上樣順序都為N端:1（37攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度 IPTG 0) 2（37攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度 IPTG 0) 3（37攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度,IPTG 0.5mM 30攝氏度 IPTG 0) 可是誘導(dǎo)出的蛋白大小不對(duì)，并且進(jìn)行蛋白純化時(shí)也純化不出來(lái)，37和30攝氏度誘導(dǎo)的結(jié)果也并不一樣，但是我去測(cè)序，結(jié)果卻是對(duì)的。。。。。。 求各路神仙進(jìn)行指點(diǎn)，小女子感激不盡，老板是新來(lái)的老板，都被罵過(guò)好幾次了，這種結(jié)果我自己實(shí)在是理解不了，跪求各位大神給予幫助  28a+C端+sibA蛋白誘導(dǎo)表達(dá)11-30-2.jpg 28a+N端+sibA蛋白誘導(dǎo)表達(dá)11-30-2.jpg |
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