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[交流]
MLL1抑制劑MM-102的研究進(jìn)展
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一、 MIL1蛋白簡(jiǎn)介 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶MLL1因其基因易位重排所引起的混合系白血病(mixed lineage leu- kemia)而得名。MLL1蛋白在基因調(diào)控、細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)分化等 生理功能中發(fā)揮著重要作用, 染色體易位重排所產(chǎn)生的MLL1融合蛋白則與急性白血病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目前人們對(duì)MLL1 蛋白的結(jié)構(gòu)和功能研究取得了很大的進(jìn)展, 為以MLL1和其相互作用蛋白為靶點(diǎn)的新型MLL白血 病藥物設(shè)計(jì)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。 MLL1的多功能發(fā)揮和它復(fù)雜的結(jié)構(gòu)息息相關(guān)。MLL基因全長(zhǎng)約為89 Kb, 由37個(gè)外顯子組成, 這些外顯子在著絲點(diǎn)至端粒方向上被轉(zhuǎn)錄, 該基因能編碼一個(gè)由3 969個(gè)氨基酸組成的多結(jié)構(gòu)域蛋白[28]。前體MLL1蛋白合成后, 在第2 666/2 667個(gè)氨基酸殘基(CS1)和第2 718/2 719(CS2)處被taspase1切斷, 產(chǎn)生N端和C端兩個(gè)多肽, MLL1N和MLL1C兩者相互結(jié)合而形成一個(gè)完整的活性蛋白。 二、 信號(hào)通路圖 三、 抑制劑MM-102 MM-102是一個(gè)具有高親和性的多肽模擬類(lèi)的MLL1抑制劑，其IC50為0.4 μM。MM-102，作為MLL1的模擬肽，展現(xiàn)了與WDR5的高親和性，相應(yīng)的IC50和Ki分別為2.9nM和<1nM。在轉(zhuǎn)染了MLL1-AF9的鼠源細(xì)胞中，MM-102特異性的降低了兩個(gè)重要的MLL1靶基因（HoxA9andMeis-1）的表達(dá)，這兩個(gè)基因是MLL1介導(dǎo)的白血病形成所必須的。另外，MM-102高效并且選擇性的抑制了含有MLL1融合蛋白的白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且誘導(dǎo)了這些細(xì)胞的凋亡。 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：MV4;11，KOPN8和K562細(xì)胞培養(yǎng)在加入10%胎牛血清以及100 U/L青霉素和鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中，溫度37 °C5% CO2. 密度為5 × 105/每孔的1 mL細(xì)胞種在12孔板中，加入空白對(duì)照DMSO（0.2%）或者M(jìn)M-102處理七天，每隔兩天更換一次培養(yǎng)基和抑制劑。遵照生產(chǎn)商的說(shuō)明使用發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒。首先，在每孔細(xì)胞中加入100 μL試驗(yàn)試劑，在回旋振蕩器上混和2 min來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞分裂。室溫孵育十分鐘后，用酶標(biāo)儀檢測(cè)。 |
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