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yuyixst木蟲 (正式寫手)
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4樓2008-05-23 16:36:32
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經(jīng)典的核酸提取方法通常是加去污劑（SDS等）裂解細(xì)胞，經(jīng)蛋白酶處理、有機(jī)溶劑提取及乙醇沉淀等步驟。 由于樣本的處理及保存對DNA和RNA（尤其是RNA）的影響較大，因此在核酸測定時標(biāo)本的處理及適當(dāng)保存對測定結(jié)果的準(zhǔn)確有效非常重要。 臨床常見的標(biāo)本有血清（漿）、全血、分泌物、棉拭子、膿液、體液、新鮮組織、石蠟切片等，這些臨床標(biāo)本的處理和保存方法各有不同。 血清（漿）標(biāo)本 一些病原體，如乙肝病毒（HBV）、丙肝病毒（HCV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）等的PCR檢測常采用血清或血漿標(biāo)本。 HBV：標(biāo)本通常由醫(yī)護(hù)人員采集，應(yīng)注意避免溶血，如為血漿標(biāo)本注意抗凝劑的選 擇，一般用EDTA-Na2或枸櫞酸納，不可使用肝素。標(biāo)本為全血時，及時分離出血漿，提取病毒DNA進(jìn)行檢測。 全血標(biāo)本 通常用來提取外周血單個核細(xì)胞核酸：如基因組DNA、線粒體DNA、總RNA等。 抗凝劑：一般使用EDTA-Na2、枸櫞酸納，不使用肝素。 前處理： 1）加適量的紅細(xì)胞裂解液（破膜液），裂解全血中的紅細(xì)胞。 2）再加適量的細(xì)胞核裂液（破核液），裂解白細(xì)胞中的細(xì)胞核，使核內(nèi)DNA 釋放出來。 3）然后再加SDS（十二烷基硫酸鈉）等去污劑，溶解脂蛋白，解聚核蛋白。 SDS可與蛋白 質(zhì)結(jié)成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性沉淀，但SDS在以后的核酸提取過 程中必須除去。 體液 體液標(biāo)本，包括胸水、腹水、腦脊液、尿液等，可直接離心，取沉淀物提取核酸。 血性胸腹水，可使用紅細(xì)胞裂解液處理： 加等體積紅細(xì)胞裂解液，震蕩混勻，置5-10分鐘 ↓ 10000rpm，離心5分鐘，棄上清 ↓ 可根據(jù)情況重復(fù)2-3次，沉淀物用于DNA提取 組織 組織有新鮮組織和石蠟切片。 新鮮組織的處理步驟： 先用生理鹽水洗二次，然后將其搗碎或剪碎（用眼科剪），加蛋白酶K消化后提取核酸 石蠟切片用于核酸提取，需先用二甲苯脫蠟，再用蛋白酶K消化后進(jìn)行DNA提取。 |
2樓2008-05-23 14:14:04
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3樓2008-05-23 14:56:58
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