 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1438 | 回復(fù): 3 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿(mǎn)足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話(huà)題的所有回帖 | |||
fairyjsj銀蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
DGGE上樣量以及數(shù)據(jù)分析相關(guān)問(wèn)題 已有2人參與
|
||
|
最近在用DGGE檢測(cè)小鼠糞便的微生物種類(lèi)的變化，8%的變性膠，濃度梯度在35%-55%，利用TAKARA的primeSTAR Max premix來(lái)擴(kuò)增微生物的V3可變區(qū)片段，第一次跑不知道上樣量多少合適就取了20ul上樣，結(jié)果85V，跑了17個(gè)小時(shí)，結(jié)果如圖： 現(xiàn)在我覺(jué)得自己存在問(wèn)題有一下幾點(diǎn)，還請(qǐng)各位經(jīng)驗(yàn)滿(mǎn)滿(mǎn)的蟲(chóng)友們給點(diǎn)意見(jiàn)： （1）上樣量一直是我糾結(jié)的問(wèn)題，因?yàn)榕苣z后會(huì)針對(duì)條帶進(jìn)行分析，所以上樣前是否需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行濃度測(cè)定，以此保證每個(gè)孔的上樣量是一致的。抑或者保證PCR時(shí)模板的含量都是一樣的，擴(kuò)增同樣的同樣的循環(huán)數(shù)后，取同樣量的PCR產(chǎn)物上樣就好了？ （2）制膠的問(wèn)題，第一次跑我沒(méi)有上濃縮膠，全部都是分離膠。我的板子是16X16的biorad的膠，上樣時(shí)按照說(shuō)明把刻度調(diào)到14.5，結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射器里的膠全部推入膠板后就沒(méi)有空間灌濃縮膠，我是不是哪里弄錯(cuò)了。 （3）關(guān)于跑膠的時(shí)間和電壓及電流，我找到了好多protocol，跑膠的電壓和時(shí)間都不相同，我這次用的是85V，20mA，跑了17個(gè)小時(shí)還沒(méi)有跑到底，由于是第一次跑覺(jué)得肯定難看就拆了板做了銀染走了一下流程。大家能否給我個(gè)比較常用的跑膠條件。 （4）分析軟件，從bio-rad的官網(wǎng)下了quantity One，但都是basic的，瓊脂糖凝膠電泳的圖都無(wú)法放進(jìn)去分析，有沒(méi)有蟲(chóng)友可以介紹一下其他的比較好用的分析軟件。 以上幾個(gè)問(wèn)題，小女子跪求各位蟲(chóng)友給點(diǎn)建議，萬(wàn)分感激！謝謝各位了！ IMG_0974.JPG |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn)
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有66人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有2人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- Matlab心得及學(xué)習(xí)方法（不斷更新）
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 求助 土壤基因組 PCR 擴(kuò)增問(wèn)題
已經(jīng)有30人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
|
1’如果一直糾結(jié)它的話(huà)就去解決它，剩余泳道弄個(gè)梯度看看嘛，目的是跑出好看的條帶，多試幾次 2‘14.5那個(gè)本山就可以灌滿(mǎn)玻璃板啦，哪會(huì)再有空間 3’我當(dāng)時(shí)用的電壓比較大200v，跑了5個(gè)小時(shí)左右都差不多，跑出的條帶還可以，六個(gè)小時(shí)也不錯(cuò)，10%的膠，另外我的是30~70%，現(xiàn)在用的好像大多是30-60%,你具體多查查文獻(xiàn)吧， 4‘當(dāng)時(shí)用的也是quantity one覺(jué)得還不錯(cuò)，現(xiàn)在看來(lái)也有不少用其他的 |
4樓2015-03-22 21:47:27
zhongzhen
銅蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10
- 帖子: 46
- 在線(xiàn): 27.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2638973
- 注冊(cè): 2013-09-06
- 專(zhuān)業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
3樓2015-03-22 17:03:06
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +8 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +5 | Faune 2026-03-30 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +13 | land xuxu 2026-03-26 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +8 | HanBeiNingZC 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +8 | cccchenso 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +6 | 來(lái)財(cái)aa 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | QiMing7 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +7 | 小蠟新筆 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿：西北大學(xué)，英一數(shù)一408-284分求調(diào)劑 +4 | 12.27 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +8 | 舉個(gè)栗子oi 2026-03-24 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5 | 0857求調(diào)劑. 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +6 | 十閑wx 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 08開(kāi)頭275求調(diào)劑 +4 | 拉誰(shuí)不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +6 | Koxui 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +4 | gajsj 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪！？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專(zhuān)317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 5/250 |
|