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八八888新蟲(chóng) (初入文壇)
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AdvCell® 脂肪干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基
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AdvCell® 脂肪干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)需要，培養(yǎng)基包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)、血清替代物以及其他補(bǔ)給成分。非常適用于培養(yǎng)哺乳類(lèi)脂肪干細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，無(wú)病毒和支原體，性能穩(wěn)定，使用該培養(yǎng)基能使干細(xì)胞在理想營(yíng)養(yǎng)平衡狀態(tài)下進(jìn)行多代擴(kuò)增而不發(fā)生分化（至少10代以?xún)?nèi)）。 ★產(chǎn)品號(hào) Cat NO:BSFMOO02 名稱(chēng) 產(chǎn)品號(hào) 規(guī)格 貯藏條件 運(yùn)輸 AdvCell® 脂肪干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 AdvCell® Adipose Tissue Derived Stem Cell Serum free Medium BM0001 500 ml 2-8℃/ 避光 冰袋 AdvCell® 細(xì)胞墊 AdvCell® Cellpad BCP0001 100 ml 2-8℃/ 避光 干冰 AdvCell® 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)添加劑 A AdvCell® Adipose Tissue Derived Stem Cell Culture Supplement A BSFM0002A 20 ml -20℃/ 避光 干冰 AdvCell® 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)添加物 B AdvCell® Adipose Tissue Derived Stem Cell Culture Supplement B BSFM0002B 1 ml -20℃/ 避光 干冰 ★產(chǎn)品組成 ★ 產(chǎn)品適用范圍 適用于人及哺乳類(lèi)來(lái)源的脂肪干細(xì)胞的培養(yǎng)。 ★ 使用注意事項(xiàng) 1.完全培養(yǎng)基的制備：將以上AdvCell® 脂肪干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基（BSFMOO02）中的AdvCell® 脂肪 干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 （BM0001)、AdvCell® 脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)添加劑 A（BSFM0002A）以及AdvCell® 脂肪 干細(xì)胞培養(yǎng)添加物 B（BSFM0002B）于37℃解凍并迅速混合。 2.完全培養(yǎng)基的存儲(chǔ)：配制好的完全培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個(gè)月內(nèi)使用完。 3.根據(jù)需要，培養(yǎng)過(guò)程中可添加一定劑量青霉素∕鏈霉素(P∕S)。 4.為達(dá)到最佳培養(yǎng)效果，所有細(xì)胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶在接種細(xì)胞前用細(xì)胞墊材料(Cellpad)﹙BCP0001﹚包 被過(guò)夜或室溫包被2小時(shí)，包被后用吸管取走多余的 AdvCell® 細(xì)胞墊材料﹙BCP0001﹚，再接種胞。 5.如客戶(hù)用自己配制的凍存液凍存的細(xì)胞是用作臨床治療，應(yīng)避免用甘油作為保護(hù)劑。 ★培養(yǎng)條件 37℃，5%CO2 ，無(wú)菌恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 ★細(xì)胞培養(yǎng) 【復(fù)蘇】 1.將配置好的完全培養(yǎng)基放入37℃水浴中預(yù)熱5-15 min； 2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37℃水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)孵育細(xì)胞）； 3.在超凈臺(tái)中加入5 ml的 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000 rpm離心5 min； 4.棄上清，加入 5 ml的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到T-25培養(yǎng)瓶中（帶濾芯）； 5.將培養(yǎng)瓶置于37℃，5%CO2 的無(wú)菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 6.第二天用新鮮的 完全培養(yǎng)基給細(xì)胞換液。 【 培養(yǎng)】 1.在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%時(shí)，即可傳代； 2.37℃水浴預(yù)熱完全培養(yǎng)基； 3.在超凈臺(tái)中，棄掉T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入2 ml PBS清洗，再加入1 ml 0.25%胰酶-EDTA 消化細(xì)胞； 4.在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓，有細(xì)胞開(kāi)始脫離瓶壁時(shí)，即可加入5 ml 完全培養(yǎng)基終止消化； 5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細(xì)胞，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞吹散； 6.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15 ml離心管中，1000 rpm離心5 min； 7.棄上清,加入15-20 ml的 完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T-75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中或按適當(dāng)比例傳到T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。確保后融合度在25-50%之間，細(xì)胞密度在1×104cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混合細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞均勻分布； 8.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于37℃，5%CO2 的無(wú)菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 9.每?jī)商煊眯迈r、預(yù)熱的完全培養(yǎng)基進(jìn)行換液。 【凍存】 1.細(xì)胞消化和計(jì)數(shù)，用胰酶對(duì)待凍存的細(xì)胞進(jìn)行消化，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。 2.1000 rpm離心5 min，去掉上清。 3.根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的情況，加入適量的凍存液，使細(xì)胞密度在1×106/ml左右（或根據(jù)自己希望達(dá)到的細(xì)胞 密度）。 4.輕輕地重懸細(xì)胞（務(wù)必重懸均勻），將重懸的細(xì)胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標(biāo)記或者貼 上標(biāo)簽）中，旋緊凍存管蓋。 5.將凍存管放入程序降溫凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。 6.第二天將細(xì)胞從-80℃轉(zhuǎn)移到液氮中。 脂肪無(wú)血清.jpg |
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