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mtf_victor新蟲 (初入文壇)
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[交流]
鎳柱重生后與原先顏色不同 已有3人參與
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實(shí)驗(yàn)室使用的是散裝的Ni-NTA beads（Qiagen），沒(méi)有重生過(guò)的Beads的顏色是“天藍(lán)色”。 使用幾次之后，我就進(jìn)行了beads的重生，重生后呈現(xiàn)“淺綠色”。 但實(shí)驗(yàn)室的其他人用相同的方法重生他自己使用后的beads，卻可以呈“天藍(lán)色”。 不知道是什么原因，特來(lái)詢問(wèn)有經(jīng)驗(yàn)的人。 重生的方法： （使用后的beads，浸泡在25%酒精里保存，以備重生。） 1） 5倍柱體積（Column Volume，CV）水洗滌。 2） 2倍EDTA洗去Ni。（柱子呈白色，略黃） 3） 5 CV水洗滌。 4） 0.5 M NaOH 洗滌2CV，浸泡30 min. 5) 5 CV水洗滌。 6) 0.1 M NiSO4 洗滌2 CV，浸泡過(guò)夜。 7） 5 CV水洗滌。 8) 2 CV 20% 酒精洗滌，并浸泡保存。 我考慮可能的原因有以下這么幾個(gè)： 1. 純化蛋白的過(guò)程中，使柱子吸附了某種色素，且該色素在上述重生過(guò)程中沒(méi)有除去。（而其他人純化的蛋白可能不含這種色素） 2. beads使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（不是新beads）或者保存、使用不當(dāng)，導(dǎo)致Ni離子螯合能力下降，使beads只能呈現(xiàn)綠色。 那么問(wèn)題來(lái)了， beads螯合能力下降會(huì)導(dǎo)致這種顏色的變化嗎？不是藍(lán)色變淺，而是變成綠色？ 會(huì)不會(huì)有其他原因?qū)е逻@種變化？ 顏色的變化是beads的結(jié)合能力的反應(yīng)嗎？ 有沒(méi)有處理方法使beads變回原來(lái)的顏色？ 謝謝，我是新手，請(qǐng)大家不吝賜教！ |
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mtf_victor
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3樓2015-01-04 18:35:55
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4樓2015-01-21 11:30:41
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5樓2015-02-10 16:06:13
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