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香菇菌種制備培養(yǎng)基的操作方法
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1、選擇優(yōu)質(zhì)馬鈴薯 去皮或挖去發(fā)芽眼，削去發(fā)青皮，切成薄片，稱取200克，置于鋼精鍋，加水1 000毫升，煮沸后小火保持30分鐘，趁熱用8層紗布過(guò)濾后放人有1 000毫升刻度的量杯(或量筒)中，補(bǔ)充水到1 000毫升，倒回鋼精鍋，加瓊脂繼續(xù)加熱，待瓊脂溶化后，再加葡萄糖，再補(bǔ)水至1000毫升，用玻璃棒攪均勻，趁熱分裝試管，或裝入三角瓶備用。 2、分裝試管 將配制好的PDA培養(yǎng)基，趁熱(60℃)倒人事先準(zhǔn)備好的量杯或玻璃漏斗，分裝試管。每支試管裝培養(yǎng)基為管長(zhǎng)的1/4，培養(yǎng)液不可貼附管口內(nèi)壁，如有沾附物必須揩拭干凈。 3、做棉塞 取適量棉花做成較緊實(shí)的棉塞，塞入試管約2厘米左右，外留1厘米，緊貼試管內(nèi)壁，松緊度以用手指提起棉塞而不脫掉為宜，光圓不起皺(如圖3―1)，爾后將試管放入鐵絲筐內(nèi)。 4、滅菌 將裝有微生物培養(yǎng)基的試管放人滅菌鍋的鐵絲筐內(nèi)，上面蓋上牛皮紙或聚丙烯塑料薄膜，包扎好，以防棉塞受潮。加熱滅菌時(shí)，排盡鍋內(nèi)的冷氣，當(dāng)溫度升到121℃時(shí)，維持30分鐘后停止加熱。待指針回到零點(diǎn)，先打開(kāi)鍋蓋的1/10開(kāi)度，等到無(wú)直沖蒸氣時(shí)，再打開(kāi)全部鍋蓋，取出試管。 5、在斜面上擺放試管 將取出的試管冷卻到50～60℃后，放到用木架或木條擺成一定角度的斜面上，小試管斜面長(zhǎng)2厘米，大試管(18×200)斜面長(zhǎng)6厘米左右。待完全凝固后，收取備用。 6、滅菌效果檢查 隨機(jī)取3管斜面，放在28℃下進(jìn)行空白培養(yǎng)5～7天后，檢查斜面上有無(wú)細(xì)菌和霉菌菌落。如果發(fā)現(xiàn)有雜菌，說(shuō)明滅菌不徹底，要重新滅菌。 |
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