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市面上的假血清實在太多了……Gibco基本上全是假的，支原體太多
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前段時間有個同學因為細胞狀態(tài)不好，培養(yǎng)基里有小黑點，懷疑是支原體污染 。于是檢測了一下，果真是的，就買了支原體清除劑。別說效果還真好，3天后細胞狀態(tài)就好了。既然細胞狀態(tài)好了，就停用了，沒想到一停用，細胞狀態(tài)就又差了。把培養(yǎng)箱、細胞房都清理一遍還是不行，就問到了我，既然這些因素都排除了，最后只有一個可能了，剛買的Gibco的胎牛血清，本來心里還想，同學實驗室真是土豪啊  ，我就問了價格，南美胎牛1500……澳州胎牛血清3000……， 簡直驚訝到了，現(xiàn)在Gibco的血清簡直是一貨難求，澳州胎牛血清已經(jīng)炒到了8000+了。就斷定這個血清肯定是假的，用檢測試劑盒檢測了一下，果然是這個問題，假血清真是害人啊，這些無良奸商  ……由于支原體比較小，濾器過濾不掉，所以大家買血清的時候一定要先試用，檢測一下支原體（現(xiàn)在好多大牌子都會有支原體檢測報告） 這里來分享一下支原體檢測方法：1，PCR檢測法。 （1） 細胞鋪24孔板，5x104個/孔； （2） 每隔1d取細胞培養(yǎng)液留樣，連取3d； （3） 細胞培養(yǎng)液95℃水浴加熱5min，12000rpm離心1min，取上清做下一步的巢式PCR檢測； （4） 巢式PCR第一輪體系和程序： 體系：模板：4步驟所得細胞培養(yǎng)液 2ul Primer-F(10mM): 1ul Primer-R(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 2min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （5） 巢式PCR第二輪體系和程序： 體系：模板：一輪PCR產(chǎn)物 2ul Primer-F2(10mM): 1ul Primer-R2(10mM): 1ul dNTP Mixture(10mM each): 1ul Taq酶(2u/ul)： 0.5ul 10XTaq酶buffer： 5ul H2O: 39.5ul Total 50ul 程序： 95℃ 2min cycles 1x 95℃ 20S 55℃ 20S 72℃ 1min 72℃ 6min cycles 1x 4℃ hold （6） 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR結果。 2支原體檢測跑膠圖-20084539882.jpg 這個Primers 是依據(jù)支原體基因組中高度保守的 16SrRNA 編碼域而設計的，只需簡單的 PCR 反應就可檢測 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常見的支原體。 2，DNA螢光染色法 利用螢光染劑（bisbenzimide, Hoechst 33258）偵測支原體污染。此染劑會結合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區(qū)域，因為支原體之DNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經(jīng)染色后，在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。 MycoplasmaOUT處理細胞前 MycoplasmaOUT處理細胞后 由于是細胞里用的產(chǎn)品，抗生素類的最好謹慎使用，這里有個之前使用MycoplasmaOUT™，是抗菌肽類型的，處理時間也短，只要3天就可以了，而且對細胞也無毒無害。 |
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