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qll8384新蟲 (初入文壇)
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[交流]
PCR問題 已有3人參與
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真菌基因組能夠P出ITS序列，但是其余序列比如EF1-α，mtSSU等，都不能P出來？這是為啥呢？ 有誰遇到過這樣的事情？！ 但是，有時(shí)候，重復(fù)相同的條件，相同的體系，盡然能出來一部分。 是在讓人捉摸不透啊。 各位蟲友，我們一般做25微升體系。EF1-α退火溫度在53℃，時(shí)間是30s，有什么不妥的嗎？ 實(shí)驗(yàn)前期，P出來的相當(dāng)順利，后期，幾乎不能出。 求原因。  謝謝大神哦  |
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kuaile5420
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2樓2015-01-13 23:13:50
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-01-14 20:01:41
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2015-01-14 20:01:41
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對(duì)的，分子實(shí)驗(yàn)就是這樣，看不見摸不著的，有時(shí)候說明都是好的，就是不出來結(jié)果，呵呵。多做幾次。 退火溫度53℃30s，25微升的體系沒有什么不妥。（退火溫度要根據(jù)你的引物確定） 還有，你是擴(kuò)增一個(gè)真菌基因組DNA上的多少個(gè)序列？一共設(shè)計(jì)了多少對(duì)引物呢？ 擴(kuò)增大于2個(gè)序列以上的話，要多重PCR，不然擴(kuò)不出來的，希望對(duì)你有所幫助 |
3樓2015-01-14 09:42:32
4樓2015-01-14 16:35:05
qll8384
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5樓2015-01-16 09:27:20
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6樓2015-01-16 09:30:28
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7樓2015-01-16 09:32:14
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8樓2015-01-16 09:40:40
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9樓2015-01-16 10:15:48
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