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yuzhoumeinv銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
wb問題請(qǐng)教 已有2人參與
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| 我今天做的wb，應(yīng)該是有S6K、磷酸化S6K、S6、磷酸化S6，結(jié)果顯影什么也沒有，請(qǐng)問會(huì)是什么原因？后來我用一塊膠顯影1分鐘，勉強(qiáng)能看到S6K，但是同一行有的深有的淺，我操作上有什么失誤嗎？ |
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董博士
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【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yuzhoumeinv: 金幣+1, ★有幫助 2015-02-05 09:49:14
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yuzhoumeinv: 金幣+1, ★有幫助 2015-02-05 09:49:14
| 磷酸化的蛋白相對(duì)來說比較難做，wb不成功有很多原因，首先可能是抗體本身的效價(jià)不好，可以調(diào)整一二抗的比例，其次就是在wb過程中的操作問題，比如蛋白的含量，轉(zhuǎn)膜調(diào)節(jié)，或者抗體孵育的問題，還需注意的一個(gè)問題是顯影過程，一般顯影時(shí)加上顯影液后一定要先反應(yīng)一會(huì)（一到兩分鐘左右），然后再進(jìn)行壓片，如果1分不夠，就繼續(xù)增加壓片時(shí)間，但如果你壓了半個(gè)小時(shí)仍然沒有顯出，那你就重新做吧。 |
2樓2015-02-01 11:23:12
yuzhoumeinv
銀蟲 (初入文壇)
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3樓2015-02-01 21:22:20
4樓2015-02-02 11:22:04
yuzhoumeinv
銀蟲 (初入文壇)
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5樓2015-02-03 09:28:52
linyingjia
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6樓2015-02-03 19:28:30
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