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zhoubin0823木蟲 (小有名氣)
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[交流]
KOD酶經(jīng)鎳柱純化后失活，什么原因？
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| 誘導(dǎo)表達(dá)的KOD酶（耐高溫），經(jīng)過熱處理得到粗酶液，一部分經(jīng)硫酸銨沉淀、酶存儲液溶解得到酶液A。另一部分過鎳柱、300mM咪唑洗脫、經(jīng)硫酸銨沉淀、酶存儲液溶解得到酶液B，相同條件下分別使用酶液A、B進(jìn)行PCR，結(jié)果顯示酶液A能pcr出目的條帶，酶液B卻不能pcr出條帶，蛋白電泳驗(yàn)證酶液B的濃度與酶液A的濃度基本一致，想與各位蟲友交流一下，到底酶液B是怎么失活的，有沒有可能是鎳柱上鎳離子或300mM咪唑使KOD酶構(gòu)象發(fā)生改變？ |
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阿Q~~
至尊木蟲 (文壇精英)
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2樓2015-03-04 11:16:28
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3樓2015-03-04 15:20:59
zhoubin0823
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4樓2015-03-05 14:12:14
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