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[求助]
有人做過(guò) trypsin, 以 BAEE 為底物的 Km 和 Vmax嗎
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按照 sigma中 用 BAEE 測(cè)定 trypsin 活性的protocol， 活性是測(cè)出來(lái)了，線性關(guān)系也不錯(cuò)，可是當(dāng)我采用不同濃度的BAEE， 測(cè)Km 和 Vmax 時(shí)， 吸光值的變化很神奇， 當(dāng)BAEE＜0.25mM時(shí)， 吸光值 雖然整體趨勢(shì)向上，當(dāng)忽高忽低。。。。。這是為什么？ BAEE 為0.25 mM時(shí)，吸光值的變化幾乎呈線性 而當(dāng)BAEE的濃度為1mM 和 2.5 mM時(shí)， 不加酶時(shí)，底物的吸光值已超過(guò)2， 估計(jì)反應(yīng)最最初的幾秒就反應(yīng)完了，這是不是沒(méi)有什么意義了。。。。 希望有經(jīng)驗(yàn)的 朋友，可以在這里分享下如何用BAEE測(cè)定 Km和Vmax的，不甚感激。 |
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2樓2015-03-06 20:35:10
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