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tingy1986金蟲 (正式寫手)
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[求助]
才剛剛學(xué)養(yǎng)細(xì)胞,老板又要我細(xì)胞熒光染色,不知道操作有無誤,心里沒底,前來求助。 已有3人參與
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有前輩用過BCECF-AM熒光染色染料嗎?才剛剛學(xué)養(yǎng)細(xì)胞,又要我熒光染色,心里沒底,前來求助。 試劑終于配好了,在life買的BCECF-AM。和配套用的pHi緩沖液kit。 試劑已經(jīng)配好了,上周也實(shí)踐了一次。由于我們實(shí)驗(yàn)室其他人也沒有做過這個(gè)實(shí)驗(yàn)。所以也不能給我多好的建議。所以前來求教。哪怕是一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)也好。 我就想問問我的操作方面,有沒有不對(duì)的地方。 如果有不對(duì)的地方,希望指導(dǎo)指導(dǎo)我。十分感謝。 我是這樣做的 1,細(xì)胞培養(yǎng)皿的培養(yǎng)液吸掉 2,pbs洗一遍 3,pbs吸掉 4,trypsin 1ml 37度培養(yǎng)箱3分鐘 5,加入培養(yǎng)基(fbs 10%)吹打成細(xì)胞懸液 6,離心 1000rpm 3分鐘 7,吸掉培養(yǎng)基 8,加入pbs 吹打成細(xì)胞懸液 9,離心 1000rpm 3分鐘 10,吸掉pbs。 11,加入pbs 10ml 吹打成細(xì)胞懸液 12,分裝到1.5ml的 tube里。 13,離心3000rpm 3分鐘 14,吸掉pbs。 15,從1.5ml的tube里,轉(zhuǎn)移一部分細(xì)胞到96孔well。 16,37度培養(yǎng)箱20分鐘 17,放入酶標(biāo)儀分析。 由于我從來沒有接觸過培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)這些,網(wǎng)上也看了一些材料,感覺不太相信自己,所以請(qǐng)達(dá)人前輩們幫忙指點(diǎn)迷津,由于想測(cè)活細(xì)胞內(nèi)的ph值。盡可能希望細(xì)胞狀態(tài)好點(diǎn)的堅(jiān)持到酶標(biāo)儀這一步。 不知道該如何操作更好一點(diǎn)。 謝謝。 |
新蟲 (初入文壇)
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至尊木蟲 (文壇精英)
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