 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (6504)
- >考研 (1472)
- >導(dǎo)師招生 (1467)
- >文獻(xiàn)求助 (536)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (327)
- >考博 (221)
- >休閑灌水 (202)
- >基金申請(qǐng) (200)
- >碩博家園 (163)
- >招聘信息布告欄 (133)
- >博后之家 (111)
- >論文投稿 (61)
- >綠色求助(高懸賞) (51)
- >找工作 (45)
- >SciFinder/Reaxys (32)
- >外文書(shū)籍求助 (22)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 807 | 回復(fù): 0 | |||
pengdu新蟲(chóng) (初入文壇)
|
[交流]
做分枝桿菌感受態(tài)及轉(zhuǎn)化的親們進(jìn)來(lái)交流下吧~
|
|
首先給大家推薦一本分枝桿菌的書(shū)<Methods in Molecular Biology Vol 101 Mycobacteria Protocols> ，道客巴巴上有，很全面，是做分枝桿菌相關(guān)研究的必備寶書(shū)�。� 本人做結(jié)核桿菌感受態(tài)及轉(zhuǎn)化有一年多時(shí)間了，大致步驟如下： 首先感受態(tài)制備：7H9+ADC 中培養(yǎng)3周。因?yàn)閷殨?shū)中有提到37℃制備的感受態(tài)比傳統(tǒng)的冰浴條件下制備的感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率更高，因此制備過(guò)程分為兩組：1，冰浴的10%甘油，4℃洗滌三遍, 2，采用37℃的10%甘油，常溫洗滌三遍。最后收集菌體-80℃保藏。 電轉(zhuǎn)：4mm電轉(zhuǎn)杯。400ul感受態(tài)。2ug質(zhì)粒。冰浴十分鐘。BIO-RAD電擊：2.5kv，25uF,1000Ω，約21~23ms。冰浴十分鐘。轉(zhuǎn)入試管，加入5ml7H9，37℃180rpm24h。涂布于潮霉素（100ug/ml）抗性7H10+OADC平板。4~6wk后觀察。 鑒定：本人轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒分為不含EGFP的和含有EGFP的。前者就是挑取單克隆培養(yǎng)2周后菌液PCR鑒定，但板子上能長(zhǎng)出的菌落很少，最后能擴(kuò)增且PCR陽(yáng)性的就更少。后者本人設(shè)想在平板就觀察到熒光，再挑取含有熒光的單克隆培養(yǎng)，但實(shí)際情況是肉眼也觀察不出來(lái)，在熒光顯微鏡在又有很多非特異綠色熒光，甚至連不含EGFP的板子上的菌落也能觀察到  總之就是很難轉(zhuǎn)化成功，是否轉(zhuǎn)進(jìn)去也不容易觀察，并且好不容易轉(zhuǎn)進(jìn)去的傳代次數(shù)多了還容易丟 各位親們支支招啊 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
384求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
081700 調(diào)劑 267分
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
269求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
一志愿211 初試270分 求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
327求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料專(zhuān)業(yè)求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
291求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 pengdu 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +3 | kotoko_ik 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +3 | yuyu宇 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿070300浙大化學(xué)358分，求調(diào)劑！
+4
|
酥酥魚(yú).. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +3 | α____ 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿211 +3 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269專(zhuān)碩求調(diào)劑 +6 | 金恩貝 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856材料專(zhuān)碩353求調(diào)劑 +4 | NIFFFfff 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 山東省面上項(xiàng)目限額評(píng)審 +4 | 石瑞0426 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +11 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 二本跨考鄭大材料306英一數(shù)二 +3 | z1z2z3879 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +10 | S.H1 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學(xué)，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章 +22 | rare12345 2026-03-18 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 320求調(diào)劑0856
+3
|
不想起名字112 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|