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接下來分享一篇PLANT CELL上的文章,為了便于理解,我將這篇文章之前工作發(fā)表的論文也列出來。 Arabidopsis Sec1/Munc18 protein SEC11 is a competitive and dynamic modulator of SNARE binding and SYP121-dependent vesicle traffic. Karnik R, Grefen C, Bayne R, Honsbein A, Köhler T, Kioumourtzoglou D, Williams M, Bryant NJ, Blatt MR. Plant Cell. 2013 Apr;25(4):1368-82 Binding of SEC11 Indicates Its Role in SNARE Recycling after Vesicle Fusion and Identifies Two Pathways for Vesicular Traffic to the Plasma Membrane Rucha Karnik, Ben Zhang, Sakharam Waghmare, Christin Aderhold, Christopher Grefen, Michael R Blatt The Plant Cell doi: http://dx.doi.org/10.1105/tpc.114.134429 這兩篇文章主要探討的是SEC11蛋白在調(diào)節(jié)SNARE蛋白功能中的作用。正如上面的帖子里提到,位于目標(biāo)膜和轉(zhuǎn)運(yùn)泡膜上的SNARE蛋白相互結(jié)合結(jié)成復(fù)合體促進(jìn)膜融合。而SEC11,是Sec1/Munc18家族的蛋白,這種蛋白也在細(xì)胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸及膜融合中發(fā)揮作用。這兩篇文章解釋的就是這種作用是什么。 第一篇文章(2013)中運(yùn)用pull-down及BiFC技術(shù),證明SEC11可以直接和SNARE家族中的一員SYP121發(fā)生直接相互作用。同時(shí),為了研究這種相互作用對(duì)細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)挠绊,作者利用了一種traffic rescue技術(shù)。這種技術(shù)是在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)secYFP(一種會(huì)從ER分泌到膜外的熒光蛋白)以及作為參照的GFP。同時(shí)過表達(dá)要研究的目的蛋白。正常情況下,secYFP會(huì)被分泌到胞外,因此在細(xì)胞內(nèi)只能看到GFP信號(hào)。如果過表達(dá)的目的蛋白干擾了囊跑運(yùn)輸,secYFP就會(huì)被截留在細(xì)胞內(nèi),因此可以看到Y(jié)FP信號(hào)。通過YFP與GFP信號(hào)比值,可以獲得一個(gè)參數(shù)表征細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)情況。該比值升高,意味著正常運(yùn)輸被干擾,即traffic block,若比值降低,則意味著運(yùn)輸恢復(fù),稱為traffic rescue。結(jié)合這個(gè)技術(shù),這篇文章證實(shí)SEC11參與調(diào)節(jié)SYP121參與的囊泡運(yùn)輸,同時(shí)SEC11 既可以與單獨(dú)存在的SYP121發(fā)生相互作用以保證它處于未激活狀態(tài),避免不需要的SNARE蛋白復(fù)合體形成,同時(shí),在SNARE形成復(fù)合體后,可以與復(fù)合體發(fā)生相互作用以穩(wěn)定復(fù)合體的存在(結(jié)論在下面的cartoon里展示出來)。 圖片2.jpg 第二篇文章是基于第一篇進(jìn)行的深入研究。在擬南芥中,存在著63個(gè)SNARE蛋白,其中一些蛋白之間功能高度相似,譬如位于細(xì)胞膜上的SYP121\SYP122,位于轉(zhuǎn)運(yùn)泡上的VAMP721\VAMP722。那么,植物細(xì)胞是怎么選擇哪對(duì)蛋白組成復(fù)合體呢?這篇文章利用前面提到的pull-down,BiFC以及基于酵母的mbSUS技術(shù),研究了蛋白相互作用及復(fù)合體形成,利用traffic rescue技術(shù)展示不同蛋白過表達(dá)對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。在syp121及syp122敲除突變體植物上進(jìn)行研究。發(fā)現(xiàn)SEC11選擇性的與SYP121而不是SYP122結(jié)合,以促進(jìn)正確的SNARE復(fù)合體形成,同時(shí),在該復(fù)合體解開時(shí),SEC11也發(fā)揮了重要的作用。(這篇文章巨復(fù)雜,就像下面貼出來的總結(jié)cartoon里展示的,所以細(xì)節(jié)就不贅述了,感興趣的蟲友可以自己去看看) 圖片1.jpg |













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