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zhi900201新蟲 (初入文壇)
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糖脂類生物表面活性劑用什么手段預(yù)測(cè)分子結(jié)構(gòu)？ 已有1人參與
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糖脂類生物表面活性劑用什么手段預(yù)測(cè)分子結(jié)構(gòu)？ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
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我先用HPLC的方法把酸沉出來的粗提物大致分開，然后用制備柱收集每一個(gè)出峰的組分。文獻(xiàn)當(dāng)中他們的做法是將每一個(gè)組分拿去打核磁，然后解譜。我的樣品情況是有一個(gè)組分豐度特別高，將近70%，所以如果其他少量的物質(zhì)不好收集，我就準(zhǔn)備拿這一個(gè)送去鑒定就好了。 核磁提供的是整個(gè)分子結(jié)構(gòu)的信息，個(gè)人覺得應(yīng)該放在結(jié)構(gòu)鑒定的最后一步，其結(jié)果用來作為確定性驗(yàn)證比較好。 在此之前，你需要做的是一些定性的實(shí)驗(yàn)。 1、薄層層析顯色。用茚三酮不顯色排除脂肽的存在，用苯酚-硫酸顯色確定糖的存在，用2,7-二氯熒光黃顯色確定脂肪酸的存在，然后可以用苯胺-磷酸顯色，看是不是海藻糖（海藻糖不顯色，而其他糖會(huì)顯色）。 2、粗提物打紅外。紅外提供的是官能團(tuán)方面的信息，你具體關(guān)注有沒有特征官能團(tuán)的位置出峰就行了。要是不放心，也可以在樣品純化之后再去打個(gè)紅外，比較一下這兩張圖的差異。 分離純化的話，文獻(xiàn)提到了兩種，一種是過硅膠柱，然后收集對(duì)應(yīng)比例洗脫液的物質(zhì)。一種是直接上液相，分析柱確定方法之后用制備柱。前者優(yōu)點(diǎn)是上樣量大，缺點(diǎn)是損失也大，且合并要用薄層點(diǎn)板，展開劑的選擇非常重要�！抑笆潜佑玫恼归_劑一直不行，就是得不到單獨(dú)的點(diǎn)，所以沒辦法用薄層層析對(duì)過了硅膠柱之后的樣品進(jìn)行合并，所以才直接用粗提物上液相來實(shí)現(xiàn)分離純化。后者的優(yōu)點(diǎn)是若方法選擇適宜，各組分之間分得較開，用制備柱很容易得到純度很高的物質(zhì)。但是液相制備柱的上樣量也就100uL左右，如果你的方法時(shí)間較長(zhǎng)，那么制備也需要好幾天一直守在液相前反復(fù)進(jìn)樣反復(fù)收集。 得到純物質(zhì)之后，就可以進(jìn)行結(jié)構(gòu)方面的鑒定了。 對(duì)于糖，你可以將純品酸解之后用氣象色譜或者液相作單糖組成分析，知道他確切的單糖組成，進(jìn)一步可以做糖苷鍵分析，用來推斷糖環(huán)部分的結(jié)構(gòu)。 而脂肪酸的部分可以對(duì)樣品進(jìn)行水解分離出游離的脂肪酸，之后上GC-MS。分子結(jié)構(gòu)的整體信息可以使用核磁或者質(zhì)譜，最后這三個(gè)還沒做過，不太清楚。 |
2樓2015-09-04 15:09:25
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