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pLent-puro-CMV建穩(wěn)定高表達(dá) 已有2人參與
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pLent-puro-CMV建穩(wěn)定高表達(dá)細(xì)胞，用puro 篩選到第六天，突然細(xì)胞都死得差不多了，后來(lái)?yè)Q成正常培養(yǎng)基，細(xì)胞也在死，狀態(tài)很差救不活了。做了兩次，一次質(zhì)粒是氯化銫大提，一次是去毒素大提試劑盒做的質(zhì)粒，質(zhì)粒應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題； 構(gòu)建同時(shí)做了別的質(zhì)粒，說(shuō)明轉(zhuǎn)染系統(tǒng)應(yīng)該也沒(méi)有問(wèn)題。 請(qǐng)問(wèn)大俠們，，咋回事呢？？？ |
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4樓2015-03-25 21:24:40
sc5921041
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2樓2015-03-25 04:16:15
junior850621
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1，轉(zhuǎn)染也沒(méi)問(wèn)題的結(jié)論是你同時(shí)瞬轉(zhuǎn)了其他質(zhì)粒嗎？有熒光標(biāo)記的還是什么讓你覺(jué)得沒(méi)問(wèn)題？ 2，抽濾病毒用0.45還是0.22濾器？0.22會(huì)讓一部分病毒失活。 3，puro篩6天的做法是怎樣決定的？不知道你做的什么細(xì)胞。我感染的絕大部分細(xì)胞puro篩選不超過(guò)48小時(shí)（T47D最長(zhǎng)96小時(shí)）。puro我用的是sigma的；也用過(guò)上海某s品牌的，真心不能用。建議同時(shí)做一個(gè)對(duì)照，沒(méi)有感染過(guò)病毒的同種細(xì)胞，類(lèi)似密度，同時(shí)加同樣量的puro。當(dāng)對(duì)照接近全死的時(shí)候立刻換液。不要等所謂的6天還是多少天。 |
3樓2015-03-25 19:19:42
junior850621
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5樓2015-03-26 13:11:20
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