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cjj1650木蟲(chóng) (小有名氣)
民工
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[求助]
普通taq擴(kuò)增有帶，primerstar擴(kuò)增無(wú)帶 已有1人參與
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各位大神，我克隆一個(gè)基因的ORF全長(zhǎng)，同樣的引物，用普通Taq酶擴(kuò)增有單一條帶，大小也和目的片段相同。但換了高保真Primerstar卻擴(kuò)增不出來(lái)，求解！ PCR體系差不多50ul，Ta是同樣的溫度，就是退火時(shí)間縮短為15 s。 |
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我欲乘風(fēng)歸去
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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2樓2015-03-29 21:00:58
18761615793
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 高保真酶保真性好？原因是它可以切掉錯(cuò)配的堿基，那么同樣的，它也可能將你的模板鏈降解掉導(dǎo)致你擴(kuò)增不出來(lái)，所以如果實(shí)驗(yàn)的要求不是非常精準(zhǔn)（比如要針對(duì)一個(gè)堿基進(jìn)行研究的），不建議使用保真性的酶，Taq聚合酶擴(kuò)增如果不好，可以使用熱啟動(dòng)聚合http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html，我們都是，小于10kb的擴(kuò)增效果都很好，而且是和多重PCR，我們使用的還能在熒光定量PCR中使用，確實(shí)不錯(cuò)哦 |
3樓2015-03-30 09:04:26
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