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張曦允新蟲 (小有名氣)
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[求助]
請教各位關于測大腸桿菌ROS用dcfh-da~
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我最近要測GO負載納米金屬材料后對大腸桿菌ROS的影響~ 打算用dcfh-da的方法~用流式測~ 但是本人沒有生物細胞方面的基礎~ 所以想請教各位蟲友們~具體要怎么操作~有沒有相關資料或者視頻可以提供參考的~希望能夠詳細一點的，具體一點的~ 我最近也看了很多用dcfh-da測ROS的帖子~對于是先負載探針還是先加材料刺激還是不能確定~我的材料與細胞的接觸時間在兩個小時以內(nèi)~ 我養(yǎng)大腸桿菌一般是做錐形瓶中培養(yǎng)18-24h，那么是直接用槍頭取一定體積的菌液嗎？還是稀釋一下?然后具體怎么操作還是比較迷茫~是直接加入dcfh-da然后再加材料嗎？中間的間隔時間有什么要求嘛？ 關于放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，就用培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)箱可以嘛？（37攝氏度，要一直震蕩還是隔三五分鐘手動震蕩） 然后離心，離心之后，我看不同的帖子，有的寫棄上清液，有說不要棄上清液，好迷茫，怎么也是對的？穩(wěn)PBS洗三次~ 然后1ml離心水洗后的液體上機嘛？ 對于ROS是種通透性物質(zhì)，可以穿過細胞膜，那么測的時候如何區(qū)別是胞內(nèi)產(chǎn)生的還是胞內(nèi)產(chǎn)生之后穿過細胞膜產(chǎn)生的熒光? 麻煩對我上面描述的過程給出指導，如果哪里寫的不對或有錯誤的地方也請指教~ |
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2樓2017-04-11 19:06:55
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