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[求助]
連接、轉(zhuǎn)化，在平板上長(zhǎng)出來(lái)的不是單菌落，是一層菌膜，根本沒(méi)有單菌落。 已有2人參與
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目的片段和載體連接過(guò)夜之后轉(zhuǎn)入TOP10感受態(tài)細(xì)胞，在平板上長(zhǎng)出來(lái)的不是單菌落，是一層菌膜·····根本沒(méi)有單菌落···· 載體是ppink-α-HC，7Kb，目的片段大概800bp。目的片段和載體是用stuⅠ和kpnⅠ-HF雙酶切處理過(guò)的。圖20150330-3的兩個(gè)帶是兩條目的片段回收之后的電泳圖，上樣量2μl。 圖20150307-1的1號(hào)泳道是載體酶切之后的條帶。 我的連接體系是20μl，T4：1μl，buffer：2μl，目的片段：10μl，載體：1μl，ddH2O：6μl。16℃連接過(guò)夜之后取10μl轉(zhuǎn)入200μl TOP10感受態(tài)細(xì)胞，再加入800μl LB培養(yǎng)基，搖培45min后，取100μl菌液，用300μl LB稀釋之后涂在LB-Amp培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出來(lái)的不是單菌落，是一層菌膜·····根本沒(méi)有單菌落···· 感受態(tài)細(xì)胞我還做過(guò)其他實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)入質(zhì)粒之后可以正常長(zhǎng)出單菌落，所以應(yīng)該不是感受態(tài)的問(wèn)題。 所以我想問(wèn)問(wèn)這種情況是出現(xiàn)了什么問(wèn)題導(dǎo)致的，該怎么解決？多謝！ 20150307-1.jpg 20150330-3 拷貝.jpg |
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liuan6126
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫手)
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
王娜dada: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-04-03 15:02:39
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
王娜dada: 金幣+5, ★★★很有幫助 2015-04-03 15:02:39
| 建議，以后做實(shí)驗(yàn)時(shí)候，記得做陰性及陽(yáng)性空白樣，否則很多時(shí)候針對(duì)錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果只能靠猜。這個(gè)情況，不能排除染菌的問(wèn)題，當(dāng)然，如果你的感受態(tài)效率高到離譜的程度，也可能會(huì)有這種現(xiàn)象，我不大看好這種可能。個(gè)人認(rèn)為，感受態(tài)或者平板染菌可能性大。因?yàn)槟銢](méi)做陰性、陽(yáng)性對(duì)照，所以，只能是可能。 |
2樓2015-04-03 11:20:57
霧里看花花開(kāi)
金蟲(chóng) (正式寫手)
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3樓2015-04-03 14:59:53
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