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[求助]
ROS活性氧檢測(cè)中如何去除懸浮細(xì)胞中的未進(jìn)入細(xì)胞的DCFH-DA 已有1人參與
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| 說(shuō)明書(shū)上只有貼壁細(xì)胞的方法。我自己的想法是通過(guò)先離心去上清液然后又加入培養(yǎng)液重懸再離心，反復(fù)幾次來(lái)清洗，但是這樣會(huì)損失細(xì)胞，影響活性氧水平檢測(cè)的結(jié)果。求教有沒(méi)有好的方法解決這個(gè)問(wèn)題。（我實(shí)驗(yàn)用的細(xì)胞是懸浮細(xì)胞，不是貼壁細(xì)胞） |
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餓的神啊
新蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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- 專業(yè): 植物病理學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
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樓主你的問(wèn)題解決沒(méi)有��？我也想用ROS檢測(cè)試劑盒，發(fā)現(xiàn)適用于貼壁細(xì)胞，可我的材料是植物葉片，發(fā)現(xiàn)篇文獻(xiàn)，可是細(xì)節(jié)方面描述的不清楚，所以想請(qǐng)教一下樓主 Leaf tissue from wild-type tobacco and tobacco constitutively expressing HopG1–HA was ground in liquid nitrogen and resus- pended in ice-cold 10 mM Tris-HCl, pH 7.3. Samples were centrifuged twice to remove cell debris and 0.1 ml of the supernatant was placed in duplicate on a Microfluor ®1 white wellplate (Thermo Scientific, http://www.thermofisher.com). 2′-7′- dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA, Invitrogen, http://www.Invitrogen.com) to a final concentration of 10 mM was added to the wells and mixed. Fluorescence was measured with an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 535 nm on a CaryEcilpse fluorometer. Protein content was determined by the Bradford assay and relative basal ROS levels calculated with wild-type tobacco were set to 1. |
2樓2015-07-15 10:10:11
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