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[求助]
關(guān)于體外腫瘤3d模型的建立 已有2人參與
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本人現(xiàn)在在作關(guān)于肺癌細(xì)胞A549的實(shí)驗(yàn)，想建立一個(gè)體外的3d腫瘤細(xì)胞球，按照文獻(xiàn)上做了很多實(shí)驗(yàn)，依然無(wú)法做出來(lái)。 主要嘗試了是兩種方法，一種是選用低熔點(diǎn)瓊脂糖和培養(yǎng)基混合后（2%的瓊脂糖），加熱到80℃混勻后，冷卻到室溫左右加入細(xì)胞和培養(yǎng)基與96孔圓底培養(yǎng)版（U底)再1500轉(zhuǎn)離心10min。結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞并沒(méi)有很好的聚在一起，很不規(guī)則的分散狀態(tài)，沒(méi)有文獻(xiàn)中圖片那樣很規(guī)則的球狀，而且感覺(jué)細(xì)胞不再生長(zhǎng)，并沒(méi)有明顯的增值。想問(wèn)問(wèn)大家其中是不是有什么技巧，還是A549這種細(xì)胞就不太適合做腫瘤球（關(guān)于A549查到的文獻(xiàn)確實(shí)較少）。 還有一種方法就是直接在圓底96孔板中離心細(xì)胞，沒(méi)有加入瓊脂糖，結(jié)果顯示細(xì)胞都在孔底，且是圓形的，但是面積很大，在共聚焦上不易于觀察。 求助做過(guò)腫瘤球的大神或者有這方面經(jīng)驗(yàn)的人。 |
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 3d細(xì)胞模型建立 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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你好，matrigel厚層成膠凝固后種細(xì)胞，球長(zhǎng)在表面，但會(huì)有一些新生的微血管會(huì)深入到膠里面，換培養(yǎng)液的時(shí)候不必?fù)?dān)心被吸走或破裂，動(dòng)作輕一點(diǎn)就行，pubmed搜Takanori Takebe，另外，我不清楚你們構(gòu)建3D球球的目的？是要做藥篩嗎還是只是拍個(gè)照片，測(cè)個(gè)體積（一般都是在24h以內(nèi)完成）啥的？如果是前者，或者你需要長(zhǎng)期培養(yǎng)，你要考慮腫瘤細(xì)胞和HUVEC本身的增殖會(huì)導(dǎo)致球的破裂，需要先摸索一下HUVEC、MSC和功能細(xì)胞的共培養(yǎng)比例，因?yàn)橹挥性谔囟ǖ谋壤秶鷥?nèi)，球才不易破裂 |
6樓2015-06-08 13:55:04
7樓2015-06-10 14:35:54
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8樓2015-06-11 19:42:20
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9樓2017-06-05 16:47:03
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