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打敗番茄炒蛋新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
一個(gè)多周一直在pcr 16S，終于p出來(lái)了，沒(méi)想到是這種結(jié)果。。。 已有1人參與
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本人初學(xué)者，最近一個(gè)周一直在用TAKARA的試劑盒PCR三個(gè)菌的16S。 兩幅圖（沒(méi)有圖我不會(huì)亂說(shuō)）第一條帶都是maker DL2000，第二、三、四條帶都是菌體的基因組： （第一幅圖是改使用了生工的試劑盒，P得結(jié)果怪怪的。。  ）（之前用rTaq酶一直都沒(méi)有P出來(lái)，改用了LA Taq酶得第二幅圖，第二幅圖用的是TAKARA試劑盒  ）各位看官老爺請(qǐng)給個(gè)建議或者提示  。沒(méi)有多少金幣求憐惜16s .jpg 16s.jpg |
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2樓2015-04-17 11:16:42
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3樓2015-04-18 12:05:37
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【答案】應(yīng)助回帖
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你1.5kb的目的片段式P出來(lái)了對(duì)嗎 你說(shuō)的16S出現(xiàn)兩個(gè)條帶的問(wèn)題，首先，要不它可能本身的問(wèn)題，其次，是非特異性產(chǎn)物（關(guān)系到引物設(shè)計(jì)，模板，擴(kuò)增使用的DNA聚合酶的特異性，你現(xiàn)在1.5kb的片段，不建議用LA Taq酶，一般特異性好的熱啟動(dòng)酶倒是可以一試） |
4樓2015-04-20 09:33:04
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5樓2015-04-20 15:01:36
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6樓2015-04-21 08:40:49
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覺(jué)得分子實(shí)驗(yàn)真是個(gè)大坑。。一遍一遍試了接近20次才發(fā)現(xiàn)是引物不對(duì)。。7樓2015-04-22 14:43:04
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8樓2015-04-22 16:59:49
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