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求助!蛋白質(zhì)切掉GST tag后沉了 已有1人參與
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| 我在BL21里表達GST-RASSF1A ,谷胱甘肽洗脫后,酶切切掉GST,蛋白就沉了(蛋白PI 9.25),是buffer不對嗎?如何篩選合適的buffer?另外GST-RASSF1A掛在beads上,不用谷胱甘肽洗脫,直接加酶切掉GST,但只elute下少量RASSF1A,大部分還在beads上,如何防止蛋白切掉tag后沉在beads上?如果沉了,怎樣洗下來?同樣蛋白帶His tag,也是相似問題,250mM咪唑只洗脫了一小半蛋白,大部分還在Ni beads上,EDTA也洗不下來(死在beads上的蛋白不做希望),如何避免蛋白沉在Ni beads上? |



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