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ziecoe銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
轉(zhuǎn)染TLR4檢測雙熒光素酶，細(xì)胞背景太高是和解？？
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細(xì)胞293FT 質(zhì)粒： TLR4100ng MD-2 100ng pBX-II luc NF-κB 50ng pRL-TK 0.5ng Invitrogen Lipo2000脂質(zhì)體 轉(zhuǎn)這4個(gè)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染6小時(shí)換液，然后等24小時(shí)用promega試劑盒裂解檢測， 1.只轉(zhuǎn)染兩個(gè)熒光質(zhì)粒的孔，背景比值0.5 2.轉(zhuǎn)染TLR4+MD-2+兩個(gè)熒光質(zhì)粒，居然比值有44倍 3.轉(zhuǎn)染TLR4+MD-2+兩個(gè)熒光質(zhì)粒，5ng/ml LPS刺激，居然還是44倍 說明轉(zhuǎn)染TLR4/MD-2自己就已經(jīng)在活化了？但是同批做的轉(zhuǎn)染TLR2就沒有問題，只有TLR4是這樣子，這是什么問題？有沒有戰(zhàn)友碰到過？ 不同批次培養(yǎng)基，不同批次血清，不同批次提的去內(nèi)毒素質(zhì)粒，都試了，還是這樣子？ 是去內(nèi)毒素提質(zhì)粒時(shí)去的不好，有殘留嗎？但是我6小時(shí)已經(jīng)全換液了 還是有支原體污染細(xì)胞了？我們到是沒有做過除支原體操作，但是貌似支原體不活化TLR4，只活化TLR2 |
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ziecoe
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2015-05-02 02:36:21
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