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[資源]
蛋白質(zhì)純化與鑒定實(shí)驗(yàn)指南
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目錄 一、能用作純化依據(jù)的蛋白質(zhì)性質(zhì) 1 二、分子相互作用的類型及其影響因素 5 三、分離方法的類型 6 參考文獻(xiàn) 7 如何使用本指南 9 第1單元 鈣調(diào)蛋白的純化 Daniel R. Marshak 11 實(shí)驗(yàn)1 活性測(cè)定：鈣調(diào)蛋白組分的活性測(cè)定 19 實(shí)驗(yàn)2 組織提取物的制備 24 實(shí)驗(yàn)3 粗分級(jí)分離 32 實(shí)驗(yàn)4 離子交換層析 39 實(shí)驗(yàn)5 疏水作用層析 46 實(shí)驗(yàn)6 鈣調(diào)蛋白的鑒定：收率的計(jì)算 51 實(shí)驗(yàn)7 鈣調(diào)蛋白的鑒定：電泳 53 、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳 53 二、無法垢劑的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 54 三、尿素梯度聚丙烯酰胺凝膠電泳與折疊分析 56 實(shí)驗(yàn)8 蛋白質(zhì)的裂解消化 59 一、鈣調(diào)蛋白的溴化氰裂解 63 二、鈣調(diào)蛋白的胰蛋白酶消化 64 實(shí)驗(yàn)9 反相高效液相色譜 66 實(shí)驗(yàn)10 鈣調(diào)蛋白的物理分析 70 一、紫外吸收光譜 70 二、蛋白質(zhì)和肽的質(zhì)譜 71 實(shí)驗(yàn)11 鈣調(diào)蛋白的化學(xué)分析 75 一、氨基酸分析 75 二、序列分析 76 試劑的配制 82 第2單元 Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子AP-1的純化 James T. Kadonaga 89 實(shí)驗(yàn)1 Hela細(xì)胞核提取物的制備 91 實(shí)驗(yàn)2 Sephacry S-300 HR凝膠過濾層析 94 一、如何裝填凝膠過濾性 96 二、Hela細(xì)胞核提取物的Sephacry S-300 HR柱層析 98 實(shí)驗(yàn)3 序列特異性DNA親和層析 101 一、用制備凝膠電泳純化寡核苷酸 105 二、DNA親和介質(zhì)的制備 107 三、親和層析中非特異性競(jìng)爭(zhēng)DNA的正確使用 112 四、親和層析的操作 113 實(shí)驗(yàn)4 DNA酶I足跡分析 117 一、DNA酶I足跡探針的制備 118 二、DNA酶I足跡分析 122 實(shí)驗(yàn)5 凝膠遷移變動(dòng)分析 126 實(shí)驗(yàn)6 肝素-Sepharose CL-2B的制備 |
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