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louise0220新蟲 (正式寫手)
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[求助]
關于細胞ROS測定遇到問題，急求解答，重謝�。�！
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我最近想用化學熒光法（DCFH-DA染料）測定胞內(nèi)的ROS含量，購買的是南京建成的試劑盒。說明書上的操作步驟是加入DCFH-DA（10μM）至培養(yǎng)基中，然后加入細胞，37℃孵育細胞30min-幾個小時，然后清洗殘余的探針，最后用PBS進行重懸后加入到96孔板中，用熒光酶標儀測定�，F(xiàn)在有以下幾個細節(jié)還不清楚：1、這樣的操作，最后的數(shù)據(jù)是怎樣表達，是熒光強度嗎？由于我不同處理組中沒法保證細胞濃度一致，用絕對熒光強度顯然不合適。 2、我的樣品不是常規(guī)的分散均勻的小細胞，而是達到mm級的生物顆粒，如果這樣的話肯定沒法加入到酶標板內(nèi)進行讀數(shù)測定。我可不可以用勻漿器搗碎后再用超聲破碎，離心后取上清液立即測定ROS，這樣的話最終結果就用熒光強度/g蛋白來表示�，F(xiàn)在不知道這種做法是否合適。 還請有經(jīng)驗的蟲子多多指教啊。。。 |
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有沒有用熒光探針測定細菌細胞ROS，求實驗方法。。新手。謝謝
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