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seebio66666新蟲 (初入文壇)
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DNAstable(R) and DNAstable(R) LD 操作手冊(cè)
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| DNAstable® and DNAstable® LD 操作手冊(cè) 1、樣品制備 ---適用于已純化的DNA,任何形式的DNA均可在DNAstable保護(hù)下長期儲(chǔ)存,包括基因組DNA、質(zhì)粒、寡核苷酸、PCR產(chǎn)物、人工染色體和復(fù)雜樣品混合DNA(例如法醫(yī)取證DNA和基因鑒定DNA樣品)。 a、絕大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)市售試劑盒與DNAstable是完全兼容的;為得到最佳效果,DNA樣品必須是已經(jīng)純化過的,無污染、不含活性DNA酶; b、在加入到 DNAstable(干式or管式)之前,純化DNA應(yīng)懸浮在水或者TE緩沖液(10nM Tris.Cl,1mM EDTA); c、加入之前,同樣應(yīng)該確定DNA樣品濃度;雖然沒有必要,但是任然建議確立一個(gè)公式,以便以后的檢索和應(yīng)用; d、為得到最佳效果,每管(孔)DNA質(zhì)量不應(yīng)超過30ug,and 不超過50ul。針對(duì)寡核苷酸,我們建議每管(孔)20ul保存,濃度≤100μM per oligo(2nmol of each oligo)。 2、樣品干燥和保存 --DNAstable 可以再室溫下保護(hù)DNA活性。每個(gè)PE管或板孔都含有DNAstable(固定在底部,粉紅色),可以保護(hù)皮克和微克級(jí)的DNA。DNAstable 是針對(duì)液體樣本的應(yīng)用,基質(zhì)溶解并在包圍樣品表面形成保護(hù)層。then 樣品需要完全干燥以便于在室溫狀態(tài)長期保護(hù)其活性穩(wěn)定。 注意:如果后期要使用分光光度計(jì)來測(cè)量樣品濃度,建議保留一個(gè)未使用的的DNAstable 管或者板孔 作為空白對(duì)照。 流程: a、確定樣品種DNA數(shù)量(μg/ml),并計(jì)算出應(yīng)加入到PE管或者板孔的體積; b、直接加入液體樣品到PE管或者板孔; c、混勻,避免氣泡產(chǎn)生 d、室溫(15-25℃)干燥 建議最終體積不要超過50ul;大體積樣品需要真空干燥以保證完全干燥,我們建議使用自然干燥(層流工作臺(tái))和真空離心干燥,所需時(shí)間見下面圖片表格。 注意:干燥需要在室溫下進(jìn)行,長時(shí)間處于潮濕環(huán)境會(huì)降低產(chǎn)品性能和保護(hù)效果。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境通常保持40-50%的相對(duì)濕度,如果超過了這一標(biāo)準(zhǔn),我們建議您使用真空干燥裝置。 e、室溫儲(chǔ)存干燥的樣品、注意防潮。 完全干燥后的樣品,需要用鋁箔袋密封。PE管式的產(chǎn)品,蓋子如果沒有受損,也可以保證密封效果。 DNAstable對(duì)溫度和濕度敏感,因此建議保存在室溫干燥環(huán)境中,長期的暴露在光照環(huán)境可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)品變色,但是不影響保護(hù)效果。避光可以防止產(chǎn)品變色。 液體DNAstable(DNAstable LD)使用說明 將20ulDNAstable LD加入到1-100ul DNA樣品的水溶液或者緩沖液中(≤30μg).上下顛倒PE管,以混勻,盡量避免產(chǎn)生氣泡。干燥過程見上述。 3、樣品復(fù)蘇 流程: a、加入10-100ul體積的水或者緩沖液到干燥的樣品管或者板孔中; 水和緩沖液的種類、體積,根據(jù)之前計(jì)算出來的DNA質(zhì)量,和具體的下游應(yīng)用來計(jì)算和選擇; b、室溫存放15min以便完全溶解; c、上下顛倒PE管,混勻樣品,避免氣泡; d、未使用的溶解后樣品可以在4℃存放,或者室溫存放10天。 未使用樣品可以再次干燥并長期存放,不影響樣品穩(wěn)定性,但是建議溶解并重復(fù)干燥次數(shù)不要超過3次。 |
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