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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 放線菌
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[求助]
放線菌 已有1人參與
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| 誰做過放線菌DNA提�。慷加檬裁捶椒ò�！ |
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【答案】應助回帖
| 接種50 μL 20%甘油保存的放線菌孢子（不產孢的菌株可用菌絲體）至5 mL的TSBY （Oxide胰胨豆湯粉30 g，Oxide酵母粉5 g，蔗糖103 g，蒸餾水1000 ml）液體培養(yǎng)基，置于30℃搖床培養(yǎng)48小時，離心收集菌體待用。以500 μL溶菌酶溶液（2mg/ml）重新懸浮50 mg菌絲體，37℃溫育約30 min，或溫育至細胞成為半透明狀。加入250 μL 2% SDS，混合振蕩約1 min直到溶液的粘度顯著下降，然后加入500 μL中性苯酚/氯仿，混合振蕩均勻后，12000 r/min離心5 min，移取上清液，棄去白色中間層。用中性苯酚/氯仿重復二次抽提直至看不見（或非常少）中間層為止，最后加入0.1倍體積的3 M醋酸鈉（pH自然），混合后加入1倍體積的異丙醇（或2.2倍體積的無水乙醇），再次混合后在室溫下放置5 min（或者在-20 ℃放置30 min），12000 r/min離心，棄去上清液，用70%乙醇洗滌DNA沉淀兩次，最后棄去所有上清液，待乙醇揮發(fā)后，溶解于一定量TE緩沖液中。如所得到的基因組DNA還需進行酶切等后續(xù)操作，則溶解于純水中。親，這是我在網上看到別的蟲友分享的方法，挺好的。 |
2樓2015-06-03 10:02:47
3樓2015-06-03 11:24:05
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4樓2015-06-03 15:09:34
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