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教你如何設計植物組培的培養(yǎng)基配方 已有2人參與
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這里主要講的是培養(yǎng)基配方的設計，培養(yǎng)基配方是貫穿整個組培體系的核心，對于培養(yǎng)基的配方可以說多種多樣，什么奇怪的培養(yǎng)基都有，不同植物，不同培養(yǎng)階段都會有針對性的培養(yǎng)基。 現(xiàn)階段培養(yǎng)基配方有三種獲取方法，我說說它們的優(yōu)缺點： 1. 文獻查閱得到的，這種獲取方法是最簡單的，當然也是最不靠譜的，現(xiàn)階段國內的研發(fā)氛圍不是很好，所以有很多文獻是濫竽充數(shù)的。如果查閱文獻，個人推薦優(yōu)先查閱外國文獻，可信度較高，但需要一定文獻閱讀功底，然后是國內一些比較靠譜的雜志，例如植物生理學通訊、看文獻記得看出處，有些雜志名字少見的就看看作個參考就行了，最后還有便是碩博士論文，這些靠譜程度還是可以的，主要是內容充實，實驗更加細致。 2. 組培企業(yè)的配方，如果說最靠譜的配方便是這個了，這些配方基本都是身經(jīng)百煉的，而且這些配方都是以營利為基準的，所以配方利用程度很高。但是這些配方都是保密的，只能托一定關系才能得到，而且廠方的配方不是絕對固定的，會隨情況而變，還有也可以找相關的高校老師獲取，當然需要需要一定的關系了。 3. 自主設計，自己設計的東西一般都比較靠譜，畢竟自己能看到材料的變化。但是一款培養(yǎng)基的實用程度靠的是時間的積累，需要不停的實驗，最后篩選出最好的一款，而且要根據(jù)植物以及階段進行不停的調整，因此自己設計需要更多的耐心和時間。 廣東環(huán)凱這里講的是自己如何設計一款培養(yǎng)基配方，先寫一個培養(yǎng)基配方給大家看看：1/2MS+糖25g/L+瓊脂6g/L+活性炭0.5g/L+NAA 0.1mg/L+6-BA 2mg/L+香蕉5% pH5.8，這是一款1L裝的石斛蘭培養(yǎng)基配方，我們可以劃分為幾個部分： 基本元素液 上面說的MS(培養(yǎng)基)，指的是氮磷鉀等植物所需要的各種元素，這種元素液有好幾種，常用的有MS、B6、N5、花寶1號等幾種，各元素液配方間主要的區(qū)別在硝態(tài)氮和銨態(tài)氮的比例，另外就是其他輔助元素的多少和比例區(qū)別。這些配方基本晚上都可以找到，廣東環(huán)凱，在微生物檢測培養(yǎng)方面經(jīng)驗豐富，一般很少有做植物組織培養(yǎng)的。 碳源 就是糖分，組培植物碳源獲取方法便是糖份，常用的糖是蔗糖，正規(guī)實驗室蔗糖都是實驗分析純級別的，價格十分貴，生產(chǎn)廠一般使用食用蔗糖便可以了。除了蔗糖有時還會用到葡萄糖、果糖等糖分，不過價格很高。 培養(yǎng)基凝固劑 指的是配方里的瓊脂，用于使培養(yǎng)基呈凝膠狀，我們還可以用到卡拉膠、明膠等。如果是液體培養(yǎng)基可以不需要加。 植物生長調節(jié)劑 一款培養(yǎng)基配方最重要的部分，設計變化最多的地方便是這里，一般包括兩種：生長素和細胞分裂素。當然還有一些其他特殊作用的激素，如生長抑制劑等。設計時主要考慮的是，加哪種不加哪種，應該加多少，以及兩種激素間的比例是多少。這三個問題是設計時考慮的主要問題。 附加物 活性炭、香蕉等等都是附加物，這些加了對植物生長有一定作用，但他們的作用機制一直還沒弄清楚。 pH值 就是培養(yǎng)基的酸堿度，一般都是5.8很少會對其進行修改，但是如果遇到一些特殊植物對酸堿度有要求時才會有變動。 設計培養(yǎng)基配方簡單概括為：將配方的其中一種進行變動，其余不變，同時要設置一個梯度，根據(jù)這個梯度觀察植物的變化，那種變化符合生產(chǎn)的要求便是最佳值。 設計首先可以從元素液開始 例如選擇不同種元素液，其他不變，觀看差異，最后選出適合的元素液，同時相同的元素液還有減少大量元素的情況和去除某些元素的情況，例如：1/2MS就是大量元素減半，設計梯度可以這樣：1/4MS、1/3MS、1/2MS、MS; 不同的糖分濃度 也可以設計出不同的實驗組; 附加物 附加物有很多，例如：土豆、香蕉、椰汁等，任何東西都可以加進去看效果，一般設計時就3個濃度：5%、10%、15% 最多的是改變植物激素 激素(植物生長調節(jié)劑)是培養(yǎng)基設計的主要要點，不同激素及其不同濃度、組合和配比都能對植物產(chǎn)生明顯的變化。設計時，可以先參考一些文獻，看看其他人使用什么激素，使用什么濃度梯度，再進行自己的設計。 一般來說想促進分裂便優(yōu)先考慮細胞分裂素、想促進生根便考慮生長素、想使植物變粗變壯便考慮矮壯素。 設計時還要考慮到激素的組合，植物激素永遠不是靠一種激素便能很好的調節(jié)的，生長素和細胞分裂素一般都是一起加的。 接著是設計濃度梯度，這時你需要考慮激素的使用濃度范圍，例如NAA的使用范圍是0.1-1mg/L，6-BA則是1-10mg/L，這種范圍可以根據(jù)文獻和一些書本、甚至是百度來查閱。 |
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2樓2018-05-26 19:00:32
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