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wosudongyang銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
小球藻中酶活的測定 已有1人參與
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小弟在嘗試測定小球藻中光合作用相關(guān)酶的一些酶活，目前有： 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(EC 2.7.7.9) 蘋果酸脫氫酶 葡萄糖—6—磷酸脫氫酶 這三種一直沒有結(jié)果； 我測定方法基本就是離心取藻泥，ddH2O 洗滌，液氮研磨，最后按照《工具酶的活力測定》書上的步驟測定， 可是結(jié)果都是沒有酶活體現(xiàn)，酶反應(yīng)曲線根本沒有變化，不知是何原因？  |
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2樓2015-06-01 12:49:15
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提取應(yīng)該沒問題吧，別的還有幾種酶能測出來，步驟的話是： 1. 加Tris-HCl緩沖液 2. 加MgCl2溶液 3. 加NADP+溶液 4. 加尿嘧啶核苷-5’-二磷酸葡萄糖溶液 5. 加a-葡萄糖磷酸變位酶溶液 6. 加葡萄糖—6—磷酸脫氫酶溶液 7. 加入待測液（空白管加純水） 8. 迅速加入無機(jī)焦磷酸鹽溶液， 立即混勻開始計(jì)時(shí) 在30℃恒溫條件下，如上表加試劑，反應(yīng)總體積為1.0ml。然后使用紫外分光光度計(jì)，選擇波長未340nm，測定光吸收值。以純水校正光吸收到0點(diǎn)，每隔半分鐘讀取各管光吸收（A），共讀3min，以A對時(shí)間作圖，取反應(yīng)最初線性部分，計(jì)算出每分鐘A的增加值為ΔA340nm/分=ΔA樣/分-Δ空/分 |
3樓2015-06-01 14:11:52
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【答案】應(yīng)助回帖
| 我初步看，好像還沒有明顯的問題。你適當(dāng)調(diào)整一下酶的反應(yīng)溫度和適當(dāng)溫和操作混合一下酶和底物，并且改變酶的濃度。我今天我這里沒有帶酶的活性測定手冊，我明天查一下實(shí)驗(yàn)手冊。 |
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wosudongyang4樓2015-06-01 14:21:17
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5樓2015-06-01 14:22:50
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