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銀蟲 (初入文壇)

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[交流] 細(xì)菌鞭毛染色及其運(yùn)動(dòng)的觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容

目的：了解細(xì)菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色法；學(xué)習(xí)觀察細(xì)菌運(yùn)動(dòng)的方法。
內(nèi)容：
1. 細(xì)菌的鞭毛染色法。
2．用壓滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)。
3．用懸滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)。

二、實(shí)驗(yàn)材料和用具

普通變形菌(Proteus vulgaris)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面、鞭毛染色液、0.01%美藍(lán)水溶液、香柏油、二甲苯、無(wú)菌水、凡士林；顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、凹載玻片、蓋玻片、鑷子、細(xì)玻棒、吸水紙。

三、操作步驟

(一)細(xì)菌鞭毛染色
1．活化菌種
將保存的變形菌在新制備的普通牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上連續(xù)移種2～3次，每次于30℃培養(yǎng)10～15h�；罨缶N備用。
2．制片
在干凈載玻片的一端滴一滴蒸餾水，用無(wú)菌操作法，以接種環(huán)從活化菌種中取少許菌苔(注意不要帶培養(yǎng)基)，在載玻片的水滴中輕沾幾下。將載玻片稍傾斜，使菌液隨水滴緩緩流到另一端，然后平放，于空氣中干燥。
3．染色
(1)滴加鞭毛染色液A液，染3～5min。
(2)用蒸餾水充分洗凈A液，使背景清潔。
(3)將殘水瀝干或用B液沖去殘水。
(4)滴加B液，在微火上加熱使微冒蒸汽，并隨時(shí)補(bǔ)充染料以免干涸，染30～60S。
(5)待冷卻后，用蒸餾水輕輕沖洗干凈，自然干燥或?yàn)V紙吸干。
4．鏡檢
先用低倍鏡和高倍鏡找到典型區(qū)域，然后用油鏡觀察。菌體為深褐色，鞭毛為褐色。注意觀察鞭毛著生位置(鏡檢時(shí)應(yīng)多找?guī)讉€(gè)視野，有時(shí)只在部分涂片上染出鞭毛)。

(二)細(xì)菌運(yùn)動(dòng)的觀察
1．壓滴法
(1)制備菌液：從幼齡菌斜面上，挑數(shù)環(huán)菌放在裝有1～2mL無(wú)菌水的試管中，制成輕度混濁的菌懸液。
(2)取2～3環(huán)稀釋菌液于潔凈載玻片中央，再加入一環(huán)0.01%的美藍(lán)水溶液，混勻。
(3)用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然后慢慢地放下蓋玻片，這樣可防止產(chǎn)生氣泡。
(4)鏡檢：將光線適當(dāng)調(diào)暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。要區(qū)分細(xì)菌鞭毛運(yùn)動(dòng)和布朗運(yùn)動(dòng)，后者只是在原處左右擺動(dòng)，細(xì)菌細(xì)胞間有明顯位移者，才能判定為有運(yùn)動(dòng)性。

2．懸滴法
(1)取潔凈蓋玻片，在四周涂少許凡士林。
(2)在蓋玻片中央滴一小滴菌液（圖9—1A）
(3)將凹玻片的凹窩向下，使凹窩中心對(duì)準(zhǔn)蓋玻片中央的菌液(圖9-1B)，輕輕地蓋在蓋玻片上，便凹玻片與蓋玻片粘在一起(注意液滴不得與凹玻片接觸)。
(4)小心將玻片翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，使菌液正好懸在窩的中央。再用火柴棒輕壓蓋玻片四周使封閉，以防菌液干燥。
(5)鏡檢：將光線適當(dāng)調(diào)暗，先用低倍鏡找到懸滴的邊緣后(圖9—1D)，再將菌液移至視野中央，換用高倍鏡觀察，注意細(xì)菌是如何運(yùn)動(dòng)的，它與分子布朗運(yùn)動(dòng)的不同。

四、注意事項(xiàng)
1．鞭毛染色液最好當(dāng)日配置當(dāng)日用，次日使用則鞭毛染色淺，觀察效果差。染色時(shí)一定要充分洗凈A液后再加B液，否則背景不清晰。
2．觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)，載玻片和蓋玻片都要潔凈無(wú)油，否則會(huì)影響細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)。有些細(xì)菌，溫度太低時(shí)不能運(yùn)動(dòng)。

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1樓 2015-06-05 15:47:47

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