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smior122銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
多孔的水凝膠材料培養(yǎng)細(xì)胞后能否拍細(xì)胞在材料上的SEM 已有4人參與
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| 我剛做了一個(gè)大孔的多孔水凝膠，孔徑在1mm左右，想問(wèn)問(wèn)大家，這種水凝膠材料是不是不可以拍細(xì)胞在材料上的SEM圖片？有人說(shuō)拍SEM前，材料的脫水處理，干燥，會(huì)導(dǎo)致固定在材料上的細(xì)胞裂掉？所以，想問(wèn)問(wèn)大家的水凝膠材料是不是都不能拍細(xì)胞與材料共培養(yǎng)的SEM？ |
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qingbo62
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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2樓2015-06-08 06:10:57
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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沒(méi)有問(wèn)題！處理得當(dāng)，完全可以！ 具體步驟如下： 1．細(xì)胞2*104/ml接種到材料上； 2．4,7,（3,5）天取樣； 3．吸棄原有培養(yǎng)基； 4．加入1mLPBS培養(yǎng)基吹洗材料* 3次； ------------這步的目的是洗去細(xì)胞及材料表面雜質(zhì) 5．吸棄PBS加入2.5-3.0% 戊二醛（固定2.5－3h）； -------這步的目的是將細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞骨架，細(xì)胞器，蛋白質(zhì)固定 6．吸棄戊二醛,30%,50%,75%,80%,95%,100%(兩次)梯度乙醇脫水（15min/次）； ---------梯度脫水是在損傷最小的情況下將細(xì)胞內(nèi)的水去掉，用酒精代替，使細(xì)胞內(nèi)原本是水的地方充填酒精，保持細(xì)胞原有形貌 7．在玻璃瓶中乙酸異戊酯替換（大于30min）； -----------用乙酸異戊酯替換細(xì)胞內(nèi)的酒精，是細(xì)胞內(nèi)完全充填乙酸異戊酯，保持細(xì)胞原有形貌 8．臨界點(diǎn)干燥后送掃描電鏡觀(guān)察。 --------出去可能存在的水分，以便上電鏡，此時(shí)的細(xì)胞完全由乙酸異戊酯充填，保持原有形貌 SEM試驗(yàn)注意事項(xiàng)： 1.戊二醛現(xiàn)配現(xiàn)用； 2.用乙酸異戊酯替換時(shí)必須使用玻璃瓶；自然風(fēng)干是絕對(duì)不允許的，風(fēng)干細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器等會(huì)坍塌； 3.如果沒(méi)有臨界點(diǎn)干燥儀，也可用冷凍干燥機(jī)干燥！ 不用謝我！這也是小木蟲(chóng)上down來(lái)的！ |
3樓2015-06-08 10:37:00
4樓2015-06-08 10:42:13
5樓2015-06-08 10:44:42
liubin
專(zhuān)家顧問(wèn) (著名寫(xiě)手)
-
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- 管轄: 生物材料
6樓2015-06-08 10:51:40
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