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ebaiao001新蟲 (小有名氣)
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招聘[無細胞蛋白表達系統(tǒng)，項目專員]
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RTS—一種高效的體外無細胞蛋白表達系統(tǒng) 北京中生柏奧生物科技有限公司（www.ebaiao.com）與德國biotechrabbit公司合作，推出一系列高效的體外無細胞蛋白表達試劑盒——RTS (Rapid Translation System)，可實現(xiàn)真核蛋白、原核蛋白、二硫鍵蛋白、Fab抗體片段、膜蛋白等各類蛋白的高效表達，反應(yīng)體系分為小、中、大三種規(guī)格，最高可實現(xiàn)24小時內(nèi)50mg蛋白表達。 一、體外無細胞蛋白表達系統(tǒng)的原理 體外無細胞蛋白表達利用大腸桿菌、麥胚或昆蟲的細胞裂解物作為基本反應(yīng)系統(tǒng)，去除裂解物中的核酸和蛋白，保留蛋白合成所必需的核糖體和酶系統(tǒng)等，進行目標蛋白的合成。PCR產(chǎn)物、質(zhì)粒載體和mRNA都可以做為反應(yīng)模板。 反應(yīng)體系可以是間歇式（batch）反應(yīng)，在這種體系中，當反應(yīng)進行4個小時左右時，由于底物的消耗和副產(chǎn)物的增多，反應(yīng)受到抑制，因此間歇式反應(yīng)時間一般為2-6小時。另外一種為CECF（Continuous Exchange Cell Free）體系，通過半透膜將反應(yīng)體系分為反應(yīng)室和供應(yīng)室。反應(yīng)底物和能量可以通過半透膜從供應(yīng)室源源不斷地向反應(yīng)室提供，而反應(yīng)產(chǎn)生的副產(chǎn)物通過半透膜擴散到供應(yīng)室，保證了反應(yīng)的長時間進行。這種CECF反應(yīng)體系可以將反應(yīng)時間延長到24小時，因此具有更高的產(chǎn)率。 二、RTS體外無細胞蛋白表達系統(tǒng)的優(yōu)勢 RTS無細胞蛋白表達系統(tǒng)通過對緩沖液系統(tǒng)和能量供應(yīng)系統(tǒng)的優(yōu)化，有效提高了蛋白合成的產(chǎn)率，稱為高產(chǎn)HY（High Yield）系統(tǒng)。HY系統(tǒng)與CECF系統(tǒng)相結(jié)合，使RTS無細胞體外蛋白表達擁有無與倫比的優(yōu)勢： 1，高產(chǎn)量：大腸桿菌500 CECF系統(tǒng)1ml反應(yīng)體系蛋白產(chǎn)量高達6mg； 2，省時：體外表達系統(tǒng)在2-6小時（batch系統(tǒng)）或24小時（CECF系統(tǒng)）可完成蛋白合成反應(yīng)； 3，高通量：體外蛋白合成系統(tǒng)可實現(xiàn)高通量蛋白合成； 4，方便：可根據(jù)目標蛋白性質(zhì)在反應(yīng)體系中加入分子伴侶、去污劑及一些輔助因子，提高蛋白的溶解性和活性； 5， 自由：可根據(jù)實驗需要，摻入熒光標記氨基酸、非天然氨基酸等； 6，廣泛：適用于毒蛋白的合成。 三、RTS 產(chǎn)品介紹 RTS無細胞體外蛋白合成試劑盒包含有原核表達系統(tǒng)如大腸桿菌系統(tǒng)及真核表達系統(tǒng)如麥胚系統(tǒng)和昆蟲系統(tǒng)等幾類。試劑盒總體介紹如下表： Mode Max. yield per reaction Linear Template No of reactions E. coli RTS 100 E. coli HY Kit Batch 20 μg / 50 μl Yes 24/96 RTS 100 E. coli Disulfide Kit CECF 80 μg / 50 μl No 24 RTS 100 E. coli Fab Kit Batch 40 μg / 140 μl Yes 10/96 RTS 500 ProteoMaster E. coli HY Kit CECF 6 mg / 1 ml No 5 RTS 500 E. coli Disulfide Kit CECF 2 mg / 1 ml No 5 RTS 9000 E. coli HY Kit CECF 50 mg / 10 ml No 1 Wheat germ RTS 100 Wheat Germ CECF Kit CECF 50 μg / 50 μl Yes 24 RTS 500 Wheat Germ CECF Kit CECF 1 mg / 1 ml No 5 Insect RTS 100 Insect Membrane Kit Batch 2 μg / 50 μl Yes 5/20 RTS 100 Insect Disulfide Kit Batch 2 μg / 100 μl Yes 10/96 四、如何選擇RTS試劑盒 1，首次做蛋白表達 • RTS 100 E.coli H.Y. 2，蛋白的溶解性和活性有問題 • RTS 100 E.coli H.Y.試做 •用GroE, DnaK或其他因子進行優(yōu)化； •使用RTS 100 Wheat Germ真核蛋白表達系統(tǒng) 3，需要表達有二硫鍵的活性蛋白 •RTS 100 Disulfide Kits 4，需要篩選Fab抗體片段 •RTS 100 E. coli Fab Kit 5，需要表達毫克級活性蛋白 •首先使用RTS 100優(yōu)化條件 •RTS 500 PM E.coli H.Y., RTS 500 E.coli Disulfide or RTS 500 Wheat germ擴大規(guī)模 •利用 RTS 9000 E.coli H.Y獲得超過 10mg 規(guī)模 6，需要獲得膜蛋白或翻譯后修飾蛋白 •RTS 100 Insect Membrane Kit 7，需要獲得有二硫鍵的膜蛋白和翻譯后修飾蛋白 •RTS 100 Insect Disulfide Kit |
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