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baronwhy木蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
pHT43質(zhì)粒在枯草中的抗性是氨芐還是青霉素啊？ 已有2人參與
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最近在做枯草，用的pHT43質(zhì)粒和WB800N宿主菌。 查的文獻(xiàn)上步驟一般是在大腸桿菌構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒，用青霉素抗性篩選，然后轉(zhuǎn)化到枯草WB800N中，用氯霉素篩選； 因?yàn)閜HT43質(zhì)粒上帶了兩個(gè)抗性基因，一個(gè)是青霉素抗性，一個(gè)氯霉素抗性。 當(dāng)時(shí)特意查了下，好像是在革蘭氏陰性菌大腸桿菌中表現(xiàn)青霉素抗性，在革蘭氏陽(yáng)性菌枯草芽孢桿菌中表現(xiàn)氯霉素抗性。（好像是因?yàn)樗麄兊摩乙蜃硬煌裁吹模?br /> 本來(lái)也沒(méi)什么，直到我看到一篇關(guān)于枯草表達(dá)的文檔：B. subtilis Recombinant Protein Expression--Procedures for inducing target gene expression and recombinant protein production in B. subtilis. 其中有這么一段： 1. Inoculate 5 ml LB media supplemented with 50 ug / ml neomycin, 20 ug / ml chloramphenical and 100 ug / ml ampicilian with WB800N(pHT43TVA-Mj) and incubate with agitation at 37 C overnight. 在WB800N(pHT43TVA-Mj)的培養(yǎng)時(shí)居然也加了青霉素，這讓我非常不能理解，如果這也可以的話，那在轉(zhuǎn)化WB800N時(shí)不就是可用青霉素篩了么，因?yàn)閃B800N是不抗青霉素的啊！ |
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2015-06-15 16:55:36, 73.34 K
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3樓2015-06-17 10:52:38
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